[发明专利]一种黄瓜大孢子培养过程中黄化胚状体转化正常植株的方法

说明书

本发明公开了一种黄瓜大孢子培养过程中黄化胚状体转化正常植株的方法。本发明公开的黄化胚状体转化正常植株的方法，包括：将黄瓜黄化胚状体在转化培养基上进行培养，实现黄化胚状体的去黄化并生长为正常植株；转化培养基含有赤霉素和萘乙酸，赤霉素在转化培养基中的浓度为0.5‑2mg·L^‑1，萘乙酸在转化培养基中的浓度为0.05‑0.2mg·L^‑1。实验证明，利用本发明的方法可使黄化胚状体成功转绿并得到正常植株，转化比率可达68.6％，本发明的方法可以大大提高黄瓜大孢子培养的植株再生率，具有很高的实用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，一种黄瓜大孢子培养过程中黄化胚状体转化正常植株的方法。

背景技术

黄瓜大孢子培养通过诱导黄瓜未授粉子房产生胚状体，再经过染色体加倍成二倍体,可以快速产生纯合的育种新材料(纯系)，提高育种效率，还可用作遗传转化的优良受体材料。通过黄瓜大孢子培养获得的健康胚状体要转移到再生培养基中进行植株的再生，而在胚状体的发生过程中由于自身的单倍体倍性、培养基的成份和外界培养环境条件等因素导致很大比例的胚状体发生黄化现象(胚状体的胚芽为黄色，培根介于黄色和白色之间，整个胚状体失去绿色)，使得胚状体不能发育成健康的植株，严重影响黄瓜大孢子培养的再生植株比率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何将黄瓜大孢子培养过程中的黄化胚状体去黄化。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了黄瓜黄化胚状体去黄化的方法，所述方法包括：将黄瓜黄化胚状体在转化培养基上进行培养，实现所述黄化胚状体的去黄化；

所述转化培养基含有赤霉素和萘乙酸，赤霉素在所述转化培养基中的浓度为0.5-2mg·L^-1，萘乙酸在所述转化培养基中的浓度为0.05-0.2mg·L^-1。

上述方法中，赤霉素在所述转化培养基中的浓度可为1mg·L^-1。萘乙酸在所述转化培养基中的浓度可为0.1mg·L^-1。

所述转化培养基具体可为向MS培养基中添加赤霉素和萘乙酸得到的培养基。

上述方法中，在进行所述培养时，所述黄化胚状体的胚根在所述转化培养基表面以下。即在进行所述培养时，需将所述黄化胚状体的胚根插到所述转化培养基中，此处对胚根插入至培养基中的深度没有特殊要求，只需将胚根插入至培养基中即可。

上述方法中，所述培养的光周期可为：光照/黑暗时间为12-18h/12-6h，如16h/8h。

上述方法中，所述培养时，光照时的光照强度可为3000LUX-8000LUX，如5000LUX。

上述方法中，所述培养的温度可为20-28℃。具体的，在进行所述培养时，光照时的温度可为24-28℃，如26℃；黑暗时的温度可为20-25℃，如22℃。

所述培养时间可为15-25天，如20天。

上述方法中，所述胚状体可为由黄瓜大孢子培养得到的胚状体。

本发明还提供了利用黄瓜黄化胚状体培养黄瓜植株的方法，所述方法包括：利用所述黄瓜黄化胚状体去黄化的方法将黄瓜黄化胚状体去黄化，然后培养得到黄瓜植株。

所述转化培养基，也属于本发明的保护范围。

本发明还提供了下述任一应用：

X1、所述转化培养基在黄瓜育种中的应用；

X2、所述转化培养基在黄瓜单倍体育种的应用；

X3、所述转化培养基在制备黄瓜单倍体中的应用；

X4、所述方法在黄瓜育种中的应用；