[发明专利]一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法有效
| 申请号： | 201810035190.9 | 申请日： | 2018-01-15 |
| 公开（公告）号： | CN108251349B | 公开（公告）日： | 2022-06-21 |
| 发明（设计）人： | 郭美锦;宋云飞;陈雨霞;王泽建;李杰;杨文国;庄英萍;储炬;肖慈英 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学;桂林莱茵生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12P33/00 |
| 代理公司： | 南宁曙华知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 45121 | 代理人： | 郑进城 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 通过 胁迫 促进 罗汉果 悬浮 细胞 生长 提升 含量 方法 | ||
1.一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，在以初代罗汉果悬浮细胞体系培养成熟罗汉果悬浮细胞过程中控制体系中钾离子浓度为100～2000mg/kg，钾钠离子浓度比为5～20:1；第0～8天开始控制所述钾钠离子浓度比；培养第15～25天收获所述罗汉果悬浮细胞；
所述初代罗汉果悬浮细胞体系通过以下步骤获得：
步骤一：取罗汉果的种胚，在含有蔗糖25～35g/L、6-苄氨基腺嘌呤0.05～0.15mg/L、萘乙酸2～6mg/L、肌醇50～150mg/L、琼脂4～6g/L、pH范围为5.9～6.0的B5固体培养基上继代培养，选取连续继代3～5次的胚性愈伤组织；
步骤二：将步骤一得到的胚性愈伤组织以接种量25～75g/L转接到含有蔗糖20～40g/L、6-苄氨基腺嘌呤0.05～0.15mg/L、萘乙酸3～5mg/L、肌醇50～150mg/L、pH范围为5.9～6.0的B5液体培养基中，并在转速为80～150r/min，培养温度为24～26℃、黑暗的摇床中培养，得初代罗汉果悬浮细胞体系。
2.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，所述钾离子浓度为1400mg/kg。
3.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，所述钾钠离子浓度比为15:1。
4.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，第1天开始控制所述钾钠离子浓度比。
5.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，使用硫酸钠控制所述钾钠离子浓度比。
6.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，培养第21天收获所述罗汉果悬浮细胞。
7.如权利要求1所述的一种通过盐胁迫促进罗汉果悬浮细胞生长及提升甜苷V含量的方法，其特征在于，所述步骤一继代次数为4次。
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