[发明专利]一种快速检测大豆花叶病毒的胶体金试纸条

说明书

本发明公开了一种快速检测大豆花叶病毒(SMV)的胶体金免疫试纸条的制备方法及其检测方法。该试纸条由样品垫、胶体金垫、NC膜、吸水滤纸和背衬组成。所述胶体金垫上包被有胶体金标记的SMV单克隆抗体，由小鼠杂交瘤细胞株BALB/c‑SMV‑CP‑9H7分泌产生；NC膜上设置有检测线和控制线，检测线上包被有SMV‑CP的多克隆抗体，控制线上包被有蛋白A。本发明的“SMV胶体金免疫试纸条”能快速、灵敏、准确、成本低、操作简便地检测中国的SMV，非常适合对田间大批量样品进行现场初筛，对农业生产上SMV病害监测和预警具有重要意义。

技术领域

本发明属于病原物检测技术领域。更具体地，涉及一种大豆花叶病毒(SMV)胶体金免疫快速检测试纸条。

背景技术

大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是侵染大豆的主要病毒之一。SMV引起的大豆花叶病毒病严重影响大豆的产量和品质。快速、准确检测相关病毒是生产上病害预警、防控、减少损失的重要手段之一。在科学研究中，植物病毒的检测方法主要有生物学检测法、电镜技术、血清学检测法(酶联免疫吸附反应(Enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)等)和分子生物学检测法(包括PCR技术、核酸探针技术等)等。生物学检测法(Biological detection method)又叫指示植物病毒检测法，是利用病毒在寄主植物上的局部或系统症状，来初步判定病毒的种类。但由于该方法费时费力，易受环境条件的影响，缺乏充足的依据，已很少采用。电镜技术(Electron microscopy)是将感病植物组织制成检测样本，在电子显微镜下观察，根据病毒粒子的形态、大小、以及细胞的超微结构等，来判断病毒的种类，是最直接的检测方法。血清学方法(Serological methods)是利用抗原、抗体蛋白的体外特异性结合来检测病毒。该方法是SMV等植物病毒定性、定量分析最常用、有效的方法之一，包括酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA)和免疫荧光技术(Immunofluorescence)等。目前使用最广泛的是ELISA测定，是将抗原、抗体包被在固相支持物上，借助与抗原、抗体结合的酶同底物的反应来检测相应的抗体或抗原，一般用双抗体夹心法(DAS-ELISA)。ELISA具有特异性强、快速、易于标准化等优点，但也存在抗体制备时间长、存在假阳性等缺点。Zhu等(2016)首次开发了一种实用、快速，基于双抗体夹心原理的SMV侧流测定法(LFA)，可以用于检测大豆叶片和种子中的SMV。分子生物学方法(Molecular biology method)是通过检测病毒核酸(DNA或RNA)来证实病毒的存在，灵敏度高，特异性强，检测病毒范围更广，并可进行大批量检测。包括核酸杂交(Nucleic acidhybridization)技术、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)等。我国科研人员建立了基于TaqMan-MGB荧光定量IC/TC-RT-PCR和多重RT-PCR的能检测SMV等多种病毒的检测体系(蔡伟等，2016；沈建国等，2016)。分离病毒照电镜虽然是诊断病毒的有效手段，其特异性强，但非常费时费力，需要专业的技术人员，不适合推广使用。血清学检测方法比较费时、费力。免疫荧光、ELISA等方法虽然具有微量、特异、快速、准确的优点，但需要比较完备的试验仪器和经验丰富的技术人员来操作和判断结果，检测一批样品整个流程需要4～8小时，对于基层工作场所很难做到。PCR及核酸探针的诊断更需要有特殊的仪器和药品，技术含量很高，一般只适于实验室诊断或研究应用，很难在基层推广。因此，迫切需要建立一种简单、快速、灵敏、廉价且适合于基层应用的病毒诊断方法。