[发明专利]一种确定林麝取香时间的方法

权利要求书

1.一种确定林麝取香时间的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）麝香样品外观形态分析

通过体视镜观察麝香外观形态，描述并记录麝香外观形态；

（2）麝香样品水分含量测定

a. 准备200μl规格离心管，准确称重后在管中加入麝香样品，液体用移液器量取10μl，固体称取5-10mg；

b. 将装有样品的离心管称重，取一个相同规格的离心管，称重后加入10μl蒸馏水，再次称重后作为对照样品与麝香样品一同干燥；

c. 将所有待测样品和对照样品放置在离心管板上，打开离心管管口，置于装有足量硫酸钙、硫酸镁和硫酸钠的封闭干燥器中，静置干燥48h；

d. 当装有对照样品的离心管重量和空管重量相同时即表示干燥彻底，对所有离心管称重，计算麝香样品中的水分含量；

（3）麝香样品主成分气质联用GC-MS色谱分析

a. 样品预处理：称取待检测的麝香样品，用预冷到-50℃的冷冻干燥机冷冻干燥12-24h，得到麝香冻干粉，称取上述麝香冻干粉0.05g，用无水CaSO₄吸水干燥72h；

b. 向上述干燥后的麝香冻干粉样品中加1ml二氯甲烷萃取15min，过滤后得到GC-MS测试样品；测试的主成分包括麝香酮、环十五烷酮、cis-9-Hexadecenal、胆固醇、3a-羟基-5b-雄甾烷-17-酮、Cholest-3-ene, (5.beta.)-、Cholesta-3,5-diene、Cholest-2-ene、胆甾烷醇和cis-1,2-Cyclododecanediol；

c. 气相色谱仪测试条件如下：

进样方式：无分流进样；

进样量：1μl；

进样口温度：250-252℃；

管柱温度：80℃，保持1分钟，

之后每分钟增加5℃直至245℃，保持1分钟，

之后每分钟增加10℃直至280℃，保持5分钟；

载气：氦气；

载气流速：1-1.05ml/min；

总分析时间：60 min；

d. 质谱仪测试条件如下：

转接口温度：280-282℃；

质谱室温度：230-232℃；

四极杆分析器温度：150℃；

（4）林麝粪便激素含量测定

a. 样品预处理：将林麝粪便样品充分研磨粉碎，称取0.50g放入10ml离心管中，加入5ml 90％乙醇，振荡萃取20min后，2500rpm离心20min，取上清液，下层沉淀再加入5ml 90％乙醇振荡萃取20min，2500rpm再次离心20min，合并两次上清液并于60℃水浴蒸干，加入1mlPBS振荡回收，并置于-20℃冰箱中冷冻待测；

b. 采用放射性免疫法测定林麝粪便样品皮质醇激素，所用皮质醇试剂盒的参数为：灵敏度≤2.0 ng/ml，批内变异系数10%，批间变异系数15%；

c. 采用发光免疫法测定林麝粪便样品睾酮和雌二醇激素，所用睾酮试剂盒和雌二醇试剂盒的参数为：回收率90-110%，分析内精密度15.0%，批间精密度20.0%；

d. 数据处理：将各月份采集麝香样品对应的林麝个体粪便睾酮、雌二醇和皮质醇测定数据进行整理，制做箱线图并计算相邻两月份激素水平的差异显著性；

完成（1）-（4）测定步骤后，可通过下述几个方面来确定林麝取香时间：

1．从麝香外观形态变化判断取香时间；

2．从麝香水分含量变化范围判断取香时间；

3．从麝香色谱图变化判断取香时间；

4．从麝香主成分含量变化判断取香时间；

5．从林麝粪样激素变化范围判断取香时间；

综合各项林麝麝香分析结果：① 麝香外观形态季节变化；②麝香水分含量季节变化；③麝香色谱图及主成分含量季节变化；④粪便生理激素季节变化与主成分相关性分析；林麝取香时间应根据繁殖麝和非繁殖麝确定取香时间，参与繁殖林麝最佳取香时间应在1月份交配结束后进行取香，非繁殖林麝取香时间可提前至12月初开始。