[发明专利]基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素

权利要求书

1.基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其特征是利用核酸适配体的特异性识别和荧光共振能量转移技术的优势来检测卡那霉素的残留量，包括以下步骤：建立基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素；通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性；运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素。

2.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中基于核酸适配体的结构开关检测卡那霉素的步骤如下：向含有0.5μM核酸适配体50μL，1μM互补链50μL，PH8.0 Tris-HCl缓冲溶液350μL的混合体系中，分别加入不同浓度的卡那霉素标准溶液，室温条件下反应20min后，测定该体系的荧光强度，其荧光信号值将随着卡那霉素浓度的不同而发生变化，根据F₂-F₁与卡那霉素的浓度建立标准曲线，卡那霉素的检出限为12.01nM，线性范围为100-700nM。

3.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中通过测定荧光光谱图测定所建立的核酸适配体结构开关对卡那霉素的选择性的步骤如下：选择实际样品中易出现残留的与卡那霉素相似的抗生素进行了选择性实验，分别为链霉素、氯霉素、四环素、土霉素、环丙沙星；首先，分别将卡那霉素、链霉素、氯霉素、四环素、土霉素、环丙沙星的标准溶液稀释到5μM；其次，将上述5μM抗生素溶液各吸取50μL分别加入到含有0.5μM核酸适配体50μL，1μM互补链50μL，PH8.0 Tris-HCl缓冲溶液350μL的体系中，涡旋混合20min后测定荧光值，结果显示只有加入卡那霉素的体系出现荧光恢复的情况，说明该结构开关体系对于实际样品中卡那霉素的检测具有较好的选择性。

4.如权利要求1所述的基于核酸适配体结构开关检测卡那霉素，其中运用所建立的核酸适配体的结构开关测定实际样品中的卡那霉素的步骤如下：取4mL的牛奶加入到15mL的离心管中，加入6mL的三重蒸馏水进行稀释后加入2mL10％的三氯乙酸和2mL氯仿，涡旋混合1min后，在温度为20℃的条件下超声15min；然后，将上述溶液以13000转/分钟的转速离心10min，吸取上清液转移至另一个15mL的离心管中，再以10000r/min的转速离心10min，吸取上清液，稀释20倍后备用；然后，加入不同浓度的卡那霉素标准溶液，按照权利要求2所述的方法，进行测定；根据F₂-F₁与卡那霉素的浓度建立工作曲线，卡那霉素的检出限为13.07nM，线性范围为100-600nM。