[发明专利]ABH人血型抗原的合成方法

权利要求书

1.一种ABH血型抗原的合成方法：包括利用“一锅多酶”体系将岩藻糖以α1-2糖苷键偶联到式(I)所示的二糖上，合成式(II)所示的三糖的步骤；利用“一锅多酶”体系将半乳糖以α1-3糖苷键偶联到式(II)所示的三糖上，合成式(III)所示的四糖的步骤；以及利用“一锅多酶”体系将N-乙酰氨基半乳糖以α1-3糖苷键偶联到式(II)所示的三糖上，合成式(IV)所示的四糖的步骤；

式(I)、式(II)、式(III)和式(IV)中，R1为羟基、叠氮取代烷基、炔基取代烷基、巯基取代烷基、α-或β-构型取代烷基、α-或β-构型丝氨酸残基、α-或β-构型苏氨酸残基。

2.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一锅多酶”体系合成式(II)所示的三糖的步骤中，先后用到的酶分别为：岩藻糖焦磷酸化酶和α1-2岩藻糖转移酶。

3.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一锅多酶”体系合成式(III)所示的四糖的步骤中，先后用到的酶分别为：半乳糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3半乳糖转移酶。

4.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，利用“一锅多酶”体系合成式(IV)所示的四糖的步骤中，先后用到的酶分别为：N-乙酰氨基葡萄糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3N-乙酰氨基半乳糖转移酶。

5.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(I)所示的β-构型的乳糖化合物的合成方法为：将乳糖与醋酐进行反应后，将其全部裸露羟基用乙酰基保护；然后利用微波反应仪将全乙酰化的乳糖进行β-构型糖苷化反应，然后依次叠氮化和脱保护后即得。

6.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(II)所示的三糖化合物合成方法为：将式(I)所示的β-构型的乳糖化合物、1.3-3.0当量岩藻糖、1.3-5.0当量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0当量鸟嘌呤核苷三磷酸、5-100mmo MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl缓冲液配制水溶液，然后将反应体系的pH值调节至4.5-8.5，然后添加鸟苷二磷酸岩藻糖焦磷酸化酶和α1-2岩藻糖转移酶，反应时间为3-72小时，待反应完成后，纯化即可直接获得式(II)所示的三糖化合物。

7.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(III)所示的B抗原四糖化合物的合成方法为：将式(II)所示的三糖化合物、1.3-3.0当量半乳糖、1.3-5.0当量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0当量尿嘧啶核苷三磷酸、5-100mmol MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl缓冲液配制水溶液，然后将反应体系的pH值调节至4.5-8.5，然后添加半乳糖激酶、糖核苷生成酶以及α1-3半乳糖转移酶，反应时间为3-72小时，待反应完成后，纯化即可直接获得式(III)所示四糖化合物。

8.如权利要求1所述的合成方法，其特征在于，式(IV)所示的四糖化合物的合成方法为：将式(II)所示的三糖化合物2、1.3-3.0当量N-乙酰氨基半乳糖、1.3-5.0当量腺嘌呤核苷三磷酸、1.3-5.0当量尿嘧啶核苷三磷酸、5-100mmol MgCl₂、10-500mmol、pH 5.0-10.0Tris-HCl缓冲液配制水溶液，然后将反应体系的pH值调节至4.5-8.5，然后添加N-乙酰氨基半乳糖激酶、UDP-N-乙酰氨基半乳糖合成酶以及α1-3N-乙酰氨基半乳糖转移酶，反应时间为3-72小时，待反应完成后，纯化即可直接获得式(IV)所示的四糖化合物。

9.如权利要求6-8任一项所述的合成方法，其特征在于，反应完成后采用薄层色谱法跟踪反应进程，展开剂为EA:CH₃OH:H₂O:HOAc＝4:2:1:0.2来检测。

10.如权利要求6-8任一项所述的合成方法，其特征在于，合成式(II)、式(III)和式(IV)所示的多糖所采用的“一锅多酶”体系中，反应温度为0-37℃，转速为0-240r/min；酶反应的停止方法是向反应中加入与反应液等体积的4℃无水乙醇并在4℃下孵育0-50分钟。