[发明专利]提取木豆素、木豆素A、木豆素C、木豆内酯A的工艺

说明书

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体涉及一种提取工艺，尤其涉及提取木豆素、木豆素A、木豆素C、木豆内酯A的工艺。

背景技术

木豆叶近年来的研究表明具有显著的抗骨质疏松和降血糖、降血脂的作用，但是控制木豆叶质量以及提取物质量的对照品缺乏，因此，本发明能提供高纯度的木豆素、木豆素A、木豆素C、木豆内酯A对照品，能很好的控制药材和提取物的质量。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足而提供一种原料来源广泛、价格低廉、提取工艺简单、分离工艺简便、快速分离的提取木豆素、木豆素A、木豆素C、木豆内酯A的工艺。

本发明技术方案是：提取木豆素、木豆素A、木豆素C、木豆内酯A的工艺，所述的提取工艺包括如下步骤：

步骤1：选材,选取一定量的干燥木豆叶；

步骤2：粗粉,将步骤1选取的木豆叶放入粉碎机中进行粉碎，得到粗粉颗粒，其中粗粉颗粒的粒径为20-60目；

步骤3：热乙醇超声提取，将步骤2得到的粗粉颗粒放入容器内，加入5倍量的70%热乙醇，超声处理10分钟，过滤，药渣再次加入5倍量的70%热乙醇超声处理一次，将两次得到的超声提取液进行混合，并冷却至室温，得到木豆叶提取液，其中70%热乙醇的温度为50℃；

步骤4：处理DA201，分别取体积为DM21容积2倍的4%氢氧化钠溶液、4%盐酸溶液、乙醇依次交替处理；

步骤5：大孔树脂吸附，将步骤3得到的超声提取液缓慢加至已经处理好的DA201大孔树脂柱上，流速为5-10ml/min，并弃去流出液；

步骤6：洗脱，取木豆叶质量1倍的70%乙醇洗脱DA201大孔树脂柱，并弃去70%乙醇洗脱液，继续用95%乙醇洗脱DA201大孔树脂柱，其中95%乙醇的质量与木豆叶的质量比为5：1；

步骤7：回收乙醇，将步骤6中的洗脱液放入到减压罐内，控制温度为60℃，压力为0.04-0.1MPa，加热回收乙醇直至没有醇味；

步骤8：处理NKA-9，取体积为NKA-9容积2倍的4%氢氧化钠溶液在10-30ml/min流速通过，去离子水洗至流出液为中性，再取体积为NKA-9容积2倍的4%盐酸溶液在10-30ml/min流速通过，去离子水洗至流出液为中性，再取体积为NKA-9容积1倍的95%乙醇洗脱，最后取体积为NKA-9容积3倍的去离子水洗；

步骤9：水洗脱，将步骤7得到的液体以流速10-20ml/min流入NKA-9大孔吸附树脂柱，然后水洗脱至流出液为无色，弃去水溶液；

步骤10：60%乙醇洗脱，将步骤9的NKA-9大孔吸附树脂柱继续加入木豆叶质量2倍的60%乙醇洗脱，并收集洗脱液；

步骤11：浓缩，将步骤10得到的60%乙醇洗脱液放至薄膜浓缩装置中在温度为60℃、压力为0.04-0.1mpa的环境中进行浓缩至无醇味，并继续浓缩成干燥的浸膏；

步骤12：拌样，将步骤11得到的浸膏中加入2倍量柱层析硅胶，混匀，并低温干燥；

步骤13：装柱，取步骤12所得的样品的10倍量柱层析硅胶，装入层析柱，上层装入步骤12样品，最上层再装入空白硅胶，连接压力泵及管路；

步骤14：洗脱，用石油醚-环己烷（40:1） 洗脱，每30ml收集一份，收集第20～30份时进行合并，低温、减压浓缩得木豆素内酯A；

步骤15：继续用石油醚-环己烷（10:1）洗脱，每30ml收集一份，收集第20～30份时进行合并，低温、减压浓缩得木豆素A；收集第31～40份时进行合并，低温减压浓缩得木豆素C；

步骤16：继续用石油醚-环己烷（5:1）洗脱，每30ml收集一份，收集第20～30份时进行合并，低温、减压浓缩得木豆素。

所述的DA201大孔树脂柱为直径8cm，高100cm。

所述的NKA-9大孔树脂柱为直径8cm，高100cm。

本发明具有以下优点：它是由干燥的木豆叶经过粗粉、超声、大孔树脂吸附、减压浓缩、柱层析、减压浓缩和低温干燥后得到的高纯度木豆素、木豆素A、C、木豆内酯A的工艺，本发明通过超声提取，不经过加热，有效成分破坏较小，将大孔树脂DA201、NKA-9联合使用来吸附木豆叶中的不同成分，再经过硅胶柱层析，分离高纯度的木豆素、木豆素A、C、木豆内酯A，整个工艺简单，收率高，提取的化合物纯度高，能作为对照品使用，总之，本发明具有原料来源广泛、价格低廉、提取工艺简单、硅胶柱层析工艺简单、分离得到的化合物纯度高，高效液相归一化法纯度均在95%以上，能作为对照品使用的优点。

具体实施方式