[发明专利]一种糖类抗原242磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种糖类抗原242（CA242）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，所述试剂盒包括：糖类抗原242校准品；偶联有糖类抗原242单克隆抗体的磁微粒悬浮液；糖类抗原242单克隆抗体酶结合物，所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥3.0，活性≥250U/mL；糖类抗原242质控品；化学发光液A液和B液；20倍浓缩洗液；反应管。另外本发明还公开了本发明试剂盒的制备方法。本发明试剂盒与现有试剂盒相比灵敏度高、可测定浓度范围宽、试剂有效期长、操作简单、检测时间短、检测自动化程度高等优点。

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体的，本发明提供了一种糖类抗原242（CA242）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

糖类抗原242（carbohydrate antigen 242）是存在于粘蛋白复合物中的唾液酸化鞘糖脂抗原。健康者和良性疾病患者血清CA242含量较低，但胰腺、胃肠道肿瘤患者血清含量升高，因此CA242可用于胰腺、胃肠道肿瘤的诊断和疗效判断。

CA242是一种鞘糖脂抗原，不同于CA19-9、CA125、CA50等肿瘤相关性抗原，作为肿瘤标记物有更高的特异度，有利于消化系统良、恶性肿瘤的鉴别。

目前，临床领域应用的检测血清CA242的方法主要有酶联免疫测定法和化学发光免疫测定法等。

酶联免疫测定法具有操作简单、无污染、结果可用仪器测定等优点，但由于敏感性相对较低，所用标记酶与底物可定量测定范围窄，及仪器测定范围窄等缺点，限制了其在微量免疫定量测定中的应用。

化学发光免疫测定经过近二十年的发展，已成为较为成熟的技术，避免了放射免疫法的污染性，及酶联免疫法的测定范围窄等缺陷，但目前医疗机构使用化学发光方法检测糖类抗原242的试剂盒还较少，尤其是利用磁微粒技术生产的试剂盒还没有使用。

本发明试剂盒将磁性分离技术、化学发光检测技术与免疫学方法三者相结合综合了化学发光法灵敏度高、线性范围广、测定速度快以及免疫法的特异性高、准确性好等优点，还利用了磁性微粒在磁场可控运动的特点可实现待测物的快速富集及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用，具有更快的检测速度。(2) 使用单克隆抗体，提高了反应的特异性。 (3) 在液相反应中，使用发光增强剂，将水分子从发光底物的发光位点排开，同时缩短了发光的达峰时间。

本试剂盒用辣根过氧化物酶标记抗体，操作简便，产品易得，相比现有技术无污染、成本低、能耗少、检测范围宽、灵敏度高、试剂盒有效期长（有效期可达两年以上），同时测值重复性好，适于临床推广。

发明内容

本发明要解决的问题是提供糖类抗原242的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了测值重复性差，酶联免疫法灵敏度低，检测范围窄等缺陷。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：糖类抗原242（CA242）磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括：糖类抗原242校准品；偶联有糖类抗原242单克隆抗体的磁微粒悬浮液；糖类抗原242抗体酶结合物，所述抗体是单克隆抗体，但是与磁微粒偶联的糖类抗原242单克隆抗体不为同一株；所用的酶为辣根过氧化物酶，辣根过氧化物酶纯度RZ≥ 3.0，活性≥ 250U/mL；糖类抗原242质控品，质控品包括浓度12U/mL的低值质控品和150U/mL的高值质控品；化学发光液A液和B液，A液为5mmol/L， pH8.6的Tris-HCl缓冲液，且该缓冲液中含有终浓度0.7g/L鲁米诺和终浓度0.165g/L对碘酚；B液为0.675g/L过氧化脲；20倍浓缩洗液；反应管。

进一步，所述的磁微粒是表面包裹带有氨基或羧基活性基团的四氧化三铁，粒径10-50nm。

进一步，所述的反应管的材料是透明聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯或玻璃。

试剂盒的制备方法，包括以下步骤：