[发明专利]一种大麻性别连锁的分子标记与应用

说明书

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种大麻性别连锁的分子标记与应用。

背景技术

STS （sequence-tagged site）是序列标签位点的简称，是指基因组中长度为200~500bp，可采用PCR技术将其专一扩增出来。由于STS序列广泛存在于真核生物基因组中，而且随机分布，具有多态性较高和稳定性好等特点，是十分有效的分子标记，被广泛应用于遗传关系分析、遗传图谱构建、品种鉴定、基因定位等领域。

大麻（Cannabis sativa L.）为大麻科（Cannabinaceae）大麻属（Cannabis L.）。属短日照异花授粉作物，雌雄异株，染色体2n=20，其中一对为性染色体。大麻根据其致幻成瘾成分四氢大麻酚 ( THC) 的含量的高低分为工业大麻和毒品大麻。工业大麻和毒品大麻在形态学上很难辨别。而且大麻是雌雄异株异花授粉作物，因而在品种间易混杂和变异。因此，正确而快速的辨别大麻品种及其性别对于工业大麻产业的良好发展和毒品大麻的稽查工作就显得十分重要。

大麻植株有雌株及雄株不同类型，不同性别的植株形态存在较大差异。大麻从种子萌发到开花一般需要 3个月以上的时间， 在此之前不能从形态上准确判断植株性别，只有在开花时才能从形态上准确判断植株性别，生产上通常采用多留苗，到时雄性植株开花后自然死亡，这样造成极大的浪费。 因此，在苗期鉴定出植株的性别，对大麻育种及栽培均具有重要的意义。利用分子标记技术能够克服形态和生理生化指标受环境及发育阶段影响的缺点，从分子水平上在苗期鉴定出植株的性别。

大麻STS标记在分子标记辅助育种和遗传多样性分析中得到极大的应用，有关大麻STS标记的专利争夺正逐步展开。但是，我国大麻STS标记开发仍十分有限，仅极少数实验室开始了有关工作。鉴于大麻STS数目多，还有大量的未被发现，且它们具有重要的理论和应用价值，特别是公共数据库中还可能存在大量的STS位点。因此，在我国开展大麻性别连锁的STS的鉴定和应用研究，开发具有我国知识产权的STS标记显得十分迫切和必要。

发明内容

本发明的目的在于：分离和鉴定大麻性别连锁的序列标签位点标记，建立大麻性别连锁的序列标签位点的PCR扩增体系并利用这些分子标记进行大麻苗期性别鉴定。

本发明实现的技术方案：

所述大麻序列标签位点标记编号CSM001和CSM002，所对应的引物序列为SEQ ID NO.1-2、2-3所示。

所述的大麻序列标签位点标记编CSM001和CSM002，其对应的序列标签位点为SEQ ID NO.4：

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从公共数据库中下载大麻序列标签位点，利用Primer 3.0软件设计STS引物，利用这些引物对大麻6个不同品种雌雄单株进行扩增。通过1.2%琼脂糖凝胶电泳研究这些引物的PCR扩增特点，得到大麻性别连锁的序列标签位点标记CSM001和CSM002。

本发明的具体步骤是：

(1)大麻序列标签位点引物开发：从公共数据库(G. Mandolino, A. Carboni, S. Forapani, V. Faeti, P. Ranalli, Identification of DNA markers linked to the male sex in dioecious hemp (Cannabis sativa L.), Theor Appl Genet, 98 (1999) 86-92.)中获得1条大麻序列标签位点(sequence tag site)。利用Primer 3（http://www.simgene.com/Primer3）设计2了对引物，其编号为CsM001和CsM002，如表1所示。