[发明专利]低分子量和极低分子量肝素获取工艺

说明书

本申请涉及低分子量和极低分子量肝素获取工艺。本发明指的是涵盖肝素‑苯索氯胺盐中肝素钠盐化、有机介质解聚和形成碱性金属盐或碱土盐的盐化阶段的低分子量(HBPM)和极低分子量(HMBPM)肝素制备工艺。也可以指通过本发明中所述工艺获取的产物。

本申请是申请日为2013年8月2日、申请号为“201380041068.8”、发明名称为“低分子量和极低分子量肝素获取工艺”的中国专利申请的分案申请，原申请是国际申请PCT/ES2013/070575的中国国家阶段申请。

技术领域

本发明指的是低分子量(HBPM)和极低分子量(HMBPM)肝素制备工艺。

背景技术

肝素是一种由糖醛酸(L-艾杜糖醛苷或D-葡萄糖醛酸)和D-氨基葡萄糖交替组成的黏多糖硫酸脂。L-艾杜糖醛苷可以是2-O-硫酸化的，D-氨基葡萄糖可以为N-硫酸化和/或6-O-硫酸化的，小范围内也可以是N-乙酰化或3-O-硫酸化的(《肝素寡糖主要成分量化和映射》Linhardt RJ，Rice KG，Kim YS et al.Biochem J 1988；254：781-787)。肝素优先作为钠盐而使用，但也可以作为其他碱性金属盐或碱土盐而使用，并且主要作为抗血栓和抗凝血药物而应用(《主要动静脉血栓栓塞抗凝治疗》Tran HAM，Ginsberg JS。《基本原则和临床实践》Colman RW，Marder VJ，Clowes AW，George JN，Goldhaber SZ(Ed)，LippincottWilliams和Wilkins；2006：1673-1688)。

根据分子量，肝素可分为普通肝素(HNF)、低分子量肝素(HBPM)和极低分子量肝素(HMBPM)。HBPM和HMBPM通过HNF原分子的解聚获得。

如在其他类型肝素中出现的一样，HBPM的抗血栓作用需要抗凝血酶III(ATIII)。通过特定的糖胺序列，肝素与抗凝血酶相连，形成HBPM-ATIII-Xa因子三元复合物。该抑制作用也称为抗血栓作用。相反的，在抗凝血作用中，凝血酶中和需要HBPM-ATIII-IIa因子三元复合物的形成，为此，至少需要18种糖类。

HBPM中肝素钠的改进很大程度上是因为与抗凝血作用相比，抗血栓作用中ATIII的活性较强。

另一方面，在普通肝素以及通过解聚方法获得的多种HBPM或HMBPM(酶、亚硝酸、β消除等)中，存在能够让我们通过具体的双糖单位成分量化法确定多糖量的方法，即结合到N-磺基-3-O-磺基-D-葡糖胺(ANS，3S)中的D-葡糖醛酸(G)。该方法可获得肝素结构中双糖占比与多糖成分间的比例关系，即确定相关肝素的抗FXa活性(低分子量肝素：二维核磁共振光谱结构分化。Guerrini M，Guglieri S，Naggi A，Sasisekharam R和Torri G。血栓与止血学术研讨会2007；33：478-487)。

在现有技术中已经记录了多种HBPM制备方法。在EP01955436专利文件中描述了通过涵盖肝素-苯索氯胺盐中肝素盐盐化、肝素-苄索氯铵盐盐化、肝素苄酯钠盐提纯和获取、苄索氯铵盐中肝素钠盐化、有机介质中的强碱解聚、苄酯皂化以及产物提纯(若有需要的话)阶段的工艺获取HBPM的过程。在本发明中生成相应的季铵盐肝素来取代需要事先形成的肝素苄酯中间体，季铵盐肝素提取物可作为基体。本发明中所描述的工艺是最简单的，可省略制备肝素苄酯中间体的步骤，既节省费用也节约了生产时间。

EP1070503专利文件描述了具备以下特性的低分子量肝素获取工艺，平均分子量：2000-4000D，抗FXa活性：100-150UI/mg，抗FIIa活性小于或等于10UI/mg。通过以非水性介质为基体的苄索肝素处理获得HBPM的具体步骤为：肝素-苯索氯胺盐中肝素钠盐化、以有机介质为基础的初级解聚、苄酯钠盐盐化、初级解聚后获得的中间体苄酯钠盐形成、以有机介质为基础的二级解聚、苄酯钠盐盐化和最后的提纯。