[发明专利]一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白及其应用

说明书

本发明涉及一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白及其应用，通过将大量癌症患者作为研究病例，对病例进行基因检测并分析，确定出人的细胞色素c氧化酶突变蛋白，根据该人的细胞色素c氧化酶突变蛋白制备基因芯片、单克隆抗体和ELISA试剂盒，为癌症的基因诊断提供指引作用，实现癌症的早诊断、早发现和相关治疗。

技术领域

本发明涉及一种基因工程领域，尤其涉及一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白及其应用。

背景技术

细胞色素c氧化酶电子传递链末端的酶。具有质子泵的作用，可将H+由基质抽提到膜间隙，同时可通过血红素中铁原子的氧化还原变化，把电子传递给还原的氧形成水。在细胞呼吸中处于细胞色素系统的末端。细胞色素c氧化酶是把呼吸底物的电子经过细胞色素系统直接传递给分子态氧(即具有自动氧化作用)。

研究发现细胞色素c氧化酶与癌症的发生关系密切。人的细胞色素c氧化酶发生突变会对人类健康造成影响，研究发现，在对某些癌症(该癌症包括肺癌、肝癌、胰腺癌和白血病)患者的外周血进行基因测序的过程中，均发现患者的细胞色素c氧化酶发生了突变，因此，对人的细胞色素c氧化酶突变的检测对判断人体是否患有癌症具有一定的指引作用。

发明内容

本发明目的在于提供一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白及其应用。

本发明技术方案包括：

第一方面，提供一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

第二方面，提供一种人的细胞色素c氧化酶突变蛋白的编码基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。

第三方面，提供一种基因芯片，包括：固相载体和固定在该载体上的核苷酸探针；所述核苷酸探针根据所述人的细胞色素c氧化酶突变蛋白的核苷酸序列，与人的细胞色素c氧化酶正常蛋白的核苷酸序列的比对结果确定。

优选地，所述核苷酸探针为SEQ ID NO:3所示的碱基序列。

第四方面，提供一种特异性识别人的细胞色素c氧化酶突变蛋白的单克隆抗体，其编码的氨基酸序列为SEQ ID NO:1所示。

第五方面，提供一种用于检测人的细胞色素c氧化酶突变蛋白的抗体的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括：包被有上述单克隆抗体的ELISA酶标板、酶标二抗、检测对象的细胞色素c氧化酶蛋白、样品稀释液、包被缓冲液、ELISA酶标板洗涤液、显色液和终止液。

优选地，所述酶标二抗为稀释的HRP辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG。

第六方面，提供一种基于上述任一所述ELISA试剂盒检测人的细胞色素c氧化酶突变蛋白的抗体的方法，包括：

a、使用所述包被缓冲液对上述单克隆抗体进行稀释，并将稀释后的所述单克隆抗体加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

b、使用所述样品稀释液将检测对象的细胞色素c氧化酶蛋白稀释成不同浓度梯度，并将不同浓度梯度的细胞色素c氧化酶蛋白分别加样至ELISA酶标板的孔中，室温孵育；

c、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

d、加入所述酶标二抗，并室温孵育；

e、甩去各孔中的液体，加入所述ELISA酶标板洗涤液，洗涤并甩干；

f、加入所述显色液，室温避光孵育，并加入所述终止液终止反应；

g、在酶标仪上测定波长为450nm处的吸光值。

优选地，进一步包括：空白对照实验。