[发明专利]抑制NOB1基因的siRNA分子

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于抑制NOB1基因的siRNA分子及其在制备抗肿瘤药物中的用途。

背景技术

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌中最常见的类型，大约85-90％的肺癌属于NSCLC。由于早期诊断困难和缺乏有效的治疗手段，NSCLC在全世界范围内被认为是因癌症导致死亡的主要病因，据报道只有不到15％的NSCLC患者生存时间在5年以上。所以，寻找NSCLC早期诊断的生物学标记和发现新的分子治疗靶点成为攻克这一致命性疾病的首要任务，也是肺癌分子病理机制研究的热点。

NOB1(Nin one binding)基因是新发现的一个与细胞周期及转录调节有密切关系的基因，2005年，Zhang等人(Mol Biol Rep.2005,32(3):185-189)克隆得到了酵母Nob1p(Nin one binding protein)基因的人类同源基因NIN1/RPN12binding protein 1homolog(S.cerevisiae)，简称NOB1。NOB1定位于人染色体16q22.1，包含9个外显子和8个内含子，cDNA全长1749碱基对(base pair，bp)。NOB1基因编码412个氨基酸序列的、分子量为46675Da的RNA结合蛋白，该蛋白的氨基端含一个RNase活性的PIN(PilT amino terminus)结构域，羧基端含一个锌指结构域，PIN结构域和转录相关，而锌指结构域在细胞周期调节中起重要作用。NOB1能促进20S Pre-rRNA向成熟的18S rRNA转变，在核糖体装配过程中发挥重要作用(Nat Struct Mol Biol.2012,19(8):744-53；Nucleic Acids Res,2012；40(7):3259-3274)。近年来研究表明NOB1的表达水平在人的多种肿瘤细胞中高表达，如乳腺癌、卵巢癌、肝癌、结肠癌等。我们前期的研究发现NOB1的mRNA和蛋白水平在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞系中明显上调，并与TNM分期、淋巴结转移和组织病理分级明显相关(Int J Biol Markers.2015,30(1):e43-48；Pathol Oncol Res,2014；20(2):461-466)。研究结果提示，NOB1可以作为潜在的NSCLC诊断生物学标记以及分子治疗靶点。

近几年，RNA干扰(RNA interfering，RNAi)作为一个新的基因治疗技术，其在抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等医药领域应用前景广阔，得到了迅速发展，部分RNA药物已进入临床试验阶段，为疑难杂症尤其是多因素的疾病如癌症、病毒感染开辟了全新的治疗途径。2016年12月23日，美国食品和药物管理局FDA批准了首个用于治疗脊髓性肌萎缩的RNA药物Spinraza(Nusinersen)的上市申请，标志着RNA药物正式加入药物大军，成为继化学药物、生物蛋白药物之后的第三大新药类型。目前国际上已有数十种siRNA药物进入临床阶段。RNAi是一种转录后的基因沉默效应，是指在生物体细胞内，外源性或内源性的双链RNA，称之为小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)识别有同源序列的mRNA，对其特异性切割，从而阻断其翻译的过程，最终抑制转录该mRNA的基因的表达(Nature.1998,391:806-811)。RNAi药物现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力，是理想的阻断基因表达的治疗手段。

发明内容

为了得到能有效治疗肿瘤比如非小细胞肺癌的RNA药物，发明人以NOB1基因为靶点，设计并筛选出数百种siRNA分子，发现其中一些能够特异性地抑制NOB1表达，其中有两组siRNA分子能有效地抑制NOB1基因。因此，本发明的第一个目的在于提供一种用于抑制NOB1基因的siRNA分子，其由如下序列的正义链和反义链组成：

正义链：5’-GGAACAAGACCCUGAAGAANn-3’(SEQ ID NO:1)，

反义链：5’-UUCUUCAGGGUCUUGUUCCNn-3’(SEQ ID NO:2)，

其中，正义链和反义链中的N相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶C、尿嘧啶U、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0、1或2。

在一种实施方式中，所述n为0，即

正义链：5’-GGAACAAGACCCUGAAGAA-3’(SEQ ID NO:3)，