[发明专利]一种体内扩增造血干细胞的方法

说明书

本发明公开一种体内扩增造血干细胞的方法，包括如下步骤：将转录因子MLL‑AF4体外转染到人的原代CD34⁺HSC中，进行体外Dox诱导，HSC移植，体内Dox诱导。本发明使得HSC体外扩增一直无法解决的技术瓶颈获得了突破，创新性地将HSC的体外扩增转为HSC的体内扩增，不仅高效而且作用持续，使体内的HSC造血能维持长达10个月以上，且保持正常状态。由于HSC的移植是目前治愈多种血液肿瘤、免疫缺陷疾病、血液遗传病和其他诸多疾病的唯一方法，本发明有望为HSC移植以及上述疾病的治疗带来新的思路，进而创造巨大的市场价值和临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，是一种体内扩增造血干细胞的方法。

背景技术

造血干细胞(Hematopoietic stem cell,HSC)移植可能使遗传血液病、免疫缺陷病以及恶性血液肿瘤等疾病完全治愈。目前HSC移植被认为是治愈上述多种疾病的唯一方法，然而，HSC移植却因为存在以下不足而受到应用的限制：(1)为获得足够数量、用于移植的HSC，必须进行大规模的骨髓抽吸或外周血分离；(2)获得的HSC数目十分有限；(3)HSC输注后不能持续地、进一步地在骨髓内扩增，更无法维持长程造血。

目前，解决上述难题的主要方法，是在移植前进行HSC的扩增，主要使用的方法有两种，包括：细胞因子支持下的CD34⁺ HSC体外扩增，以及基质支持下的扩增培养。然而HSC在上述体外培养条件下，大都发生不对称分裂，这意味着在体外培养条件下，HSC很容易大量走向分化，形成大量祖细胞，从而不能预期得到大量的HSC。此外，由于这些技术往往也不能使得HSC在体内长久地保持干性与分化的特性，从而难以维持长程造血。因此，目前HSC扩增领域的主要难题是既要获得一定总量的各系造血祖细胞，又要保持一定数量和质量的HSC，这样就存在着扩增与分化的矛盾。解决这一矛盾成为HSC扩增的关键性难题。

HSC是不均一的细胞群体，既包括早期的、原始阶段的干细胞群体，也包括较成熟的祖细胞群体。而目前的HSC体外扩增方法，主要大量扩增的原始细胞下游的、不同阶段的祖细胞，而早期的、大部分处于G0/G1期的原始HSC却很难被扩增。这样就造成了HSC经过体内移植后，产物多是成熟细胞，而造血祖细胞的产量很少，因而体内的造血重建难以得到长久的维持。

发明内容

本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供一种体内扩增造血干细胞的方法，该方法简便易行，可使人的HSC在进行高效的体内扩增的同时保持其干性，可长久且稳定地在体内重建各系的造血生成。

本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供MLL-AF4基因或蛋白的制药用途。

为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：

一种体内扩增造血干细胞的方法，包括如下步骤：将转录因子MLL-AF4体外转染到人的原代CD34⁺ HSC中，进行体外Dox诱导，HSC移植，体内Dox诱导。

作为本发明的一个优选实施方案，所述体外转染前包括原代HSC的体外培养步骤，培养体系如下：SCF(100ng/ml),TPO(100ng/ml),FLT3(100ng/ml),IL-6(20ng/ml),和SR1(0.75μM)。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

MLL-AF4基因或蛋白在制备用于调节造血干细胞体内扩增的药物中的用途，所述的调节是指促进造血干细胞在受治疗者体内的扩增和干性维持。

包含MLL-AF4基因或其片段的质粒在制备用于调节造血干细胞体内扩增的药物中的用途，所述的调节是指促进造血干细胞在受治疗者体内的扩增和干性维持，所述造血干细胞在移植前用所述质粒进行体外转染。