[发明专利]一种基于阳离子聚合物检测芥子碱硫氰酸盐的荧光检测方法

说明书

本发明公开了一种基于阳离子聚合物检测芥子碱硫氰酸盐的荧光检测方法，以阳离子聚合物聚(9,9‑双(6'‑N,N,N‑三甲胺盐‑己烷基)‑芴亚苯基)(PFP)为荧光能量供体，通过添加不同量的芥子碱硫氰酸盐，将吸附在氧化石墨烯表面的荧光素标记的单链核酸竞争下来，从而以荧光素标记的单链核酸为荧光受体，产生荧光共振能量转移，荧光信号的变化与芥子碱硫氰酸盐的添加量呈线性关系，从而实现对芥子碱硫氰酸盐的检测。本发明所述检测芥子碱硫氰酸盐的方法，采用均相检测，无需前期预处理步骤，特异性强，灵敏度和准确度高，成本低廉，更加适用于快速科研分析。

技术领域

本发明涉及一种基于阳离子聚合物检测芥子碱硫氰酸盐的荧光检测方法，属于生物分析检测技术领域。

背景技术

芥子碱(SP)是十字花科植物中重要的次生代谢产物，广泛存在于如莱菔子、白芥子等中。具有抗菌、抗氧化、抗辐射、降血压等生理作用，潜在应用价值巨大。另外，芥子碱的含量也是评价相关植食性产品产品质量的重要指标，所以，发展简单高效灵敏的芥子碱检测方法具有重要意义。

对于芥子碱的检测方法有质谱法、高效液相色谱法、电化学方法、紫外分光光度法等，这些传统的检测方法存在样品预处理复杂、需要依赖专业技术人员及精密仪器、检测灵敏度低等不足，常常不能满足研究分析的要求。近来，一些荧光分析方法被开发用于芥子碱的检测，尽管操作简单，但存在检测灵敏度不够，信噪比低等缺点，所以开发均相、简单、灵敏度高的芥子碱检测方法仍具有较高的科学和实用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种芥子碱硫氰酸盐荧光检测方法，可特异性检测芥子碱硫氰酸盐，均相操作，无需前期预处理步骤，灵敏度和准确性高。

本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：

一种基于阳离子聚合物检测芥子碱硫氰酸盐的荧光检测方法，以聚(9,9-双(6'-N,N,N-三甲胺盐-己烷基)-芴亚苯基)(PFP)阳离子聚合物为荧光能量供体，通过添加不同量的芥子碱硫氰酸盐，将吸附在氧化石墨烯表面的荧光素标记的单链核酸竞争下来，从而以荧光素标记的单链核酸为荧光受体，产生荧光共振能量转移，荧光信号的变化与芥子碱硫氰酸盐的添加量呈线性关系，从而实现对芥子碱硫氰酸盐的检测。

进一步地，一种基于阳离子聚合物检测芥子碱硫氰酸盐的荧光检测方法，主要包括以下步骤：

(1)配制聚(9,9-双(6'-N,N,N-三甲胺盐-己烷基)-芴亚苯基)(PFP)阳离子聚合物溶液；配制一系列浓度的芥子碱硫氰酸盐标准溶液；

(2)将氧化石墨烯溶液、荧光素标记的单链核酸(FAM-DNA)、缓冲溶液与等体积不同浓度的芥子碱硫氰酸盐标准溶液混合，接着加入阳离子聚合物PFP溶液，反应后进行荧光分析，记录其在300～390nm激发波长下的荧光光谱以及荧光强度F；将芥子碱浓度为0时获得的荧光强度，记作空白值F₀；

(3)以步骤(2)所得荧光强度变化值△F(F-F₀)为纵坐标，芥子碱硫氰酸盐的浓度为横坐标，建立芥子碱硫氰酸盐浓度的荧光响应标准曲线；

(4)在与步骤(2)平行的条件下测定待测溶液中的荧光强度并扣除空白值F₀后，代入步骤(3)所述标准曲线，从而计算得到待测溶液中芥子碱硫氰酸盐的浓度。

按上述方案，聚(9,9-双(6'-N,N,N-三甲胺盐-己烷基)-芴亚苯基)(PFP)阳离子聚合物溶液以水和甲醇为溶剂，PFP的浓度在0.1～5μg/mL范围内，甲醇和水的体积比在0.08～0.4％范围内。

按上述方案，所述芥子碱硫氰酸盐标准溶液的浓度范围为0～200μg/mL。