[发明专利]一种反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型的建立方法

说明书

本发明涉及一种反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型建立方法，包括如下操作：选取6‑7周龄的小鼠，麻醉所选取的小鼠；固定小鼠体位并进行备皮；消毒小鼠颈部皮肤，剪开颈部皮肤并钝性分离皮下组织；暴露小鼠的双侧颈总动脉；将小鼠双侧颈总动脉与周围组织、神经分离；夹闭双侧颈总动脉，并剪小鼠尾放血3ml，热凝止血；停止夹闭，恢复血流；继续实施步骤(4)和(5)，并且不再剪小鼠尾放血；实施结束后，缝合小鼠皮肤，反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型建立完成；本发明所述建立方法符合目前人类脑缺血疾病的发病基本理念，能真实模拟脑缺血疾病的病理过程，并且建立的反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型成功率高，稳定性好。

技术领域

本发明属于实验动物模型领域，具体涉及一种反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型建立方法。

背景技术

中风和循环停滞干扰血液流向大脑，造成相当大的组织损伤。在世界范围，中风是第二 大死亡原因。随着全球人口在未来20年的老龄化，中风的发病率将上升，减少或预防脑缺血 患者神经损伤的主要方法是迅速恢复缺血血流。然而，血液循环的恢复会导致缺血性脑损伤 患者的额外损伤和加重神经功能缺损，经过多年的深入研究，仍未完全理解其基本机制，一 种快速、有效的啮齿类动物的反复脑缺血再灌注损伤模型是目前该类疾病的中医学，病因学， 病理学和药学研究所亟需的。

目前广泛采用的七血管闭塞法、四血管闭塞法、心脏骤停全脑缺血模型法，存在着制作 过程复杂，不能一次完成，动物的死亡率高以及缺血效果不明显的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种反复脑缺血再灌注损伤小鼠模型建立方 法。

为实现上述技术目的，本发明所述模型建立方法的技术方案是这样实现的：

所述模型建立方法，包括如下具体步骤：

步骤1、选取6-7周龄的小鼠，麻醉所选取的小鼠；

步骤2、固定小鼠体位，采用剃毛器具去除小鼠颈部毛发进行备皮；

步骤3、消毒小鼠颈部皮肤，剪开颈部皮肤并钝性分离皮下组织；

步骤4、暴露小鼠的出双侧颈总动脉，用医用镊子将小鼠颈部皮肤提起，并用眼科直剪 沿小鼠头尾方向剪开一个切口，再用医用镊子沿上下方向扩展切口1cm；

步骤5、将双侧颈总动脉与周围组织、神经进行分离；

5.1、鉴于小鼠颈总动脉和神经并行在气管同侧，使用第一只镊子的单侧镊腿沿气管顺势 向下将颈总动脉挑住，并保持在气管平行位置；

5.2、再用第二只镊子两侧镊腿置于动脉和神经下面，固定保持在气管平行位置，退出第 一只镊子的单侧镊腿；将第一只镊子的单侧镊腿伸入动脉与神经之间，第一只镊子的单侧镊 腿的锯齿面朝向颈总动脉，光滑面朝向神经，沿血管走行方向滑动一次，分离出长3mm的缝 隙；退出第二只镊子，此时小鼠的神经在下、颈总动脉在上，第一只镊子的单侧镊腿在两者 之间；使用第一只镊子抬起颈总动脉高出气管水平，以增大颈总动脉与神经之间缝隙宽度； 使用第二只镊子的单侧镊腿伸入缝隙，第二只镊子的单侧镊腿的光滑面朝向神经侧，在神经 血管粘连出轻轻滑动，继而剥离，直至剥离长度达到8mm，退出第二只镊子的单侧镊腿；仔 细观察颈总动脉，单纯的颈总动脉因为失去了神经的伴行和包膜的包裹，颜色呈红色，没有 光泽，至此能够确认小鼠颈总动脉与周围组织、神经完成分离，并将用生理盐水湿润的手术 丝线穿过颈总动脉下，颈总动脉两侧丝线分别预留3cm；

步骤6、夹闭小鼠双侧颈总动脉，并使用眼科直剪剪小鼠尾，放血3ml，热凝止血；

优选的，在夹闭过程中，在小鼠颈部两侧加垫纱布，抬高动脉夹的尾部，使动脉夹平放， 避免动脉夹夹闭血管后因为自重斜落在颈部皮肤上，形成杠杆，高高挑起颈动脉，使其因牵 拉或干燥而造成损伤；

步骤7、停止夹闭小鼠双侧颈总动脉，恢复血流；