[发明专利]一种嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法

说明书

本发明涉及植物保护和生物技术领域，公开了一种嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法，基于嗜卷书虱SOD1基因，合成特异dsRNA，利用冷冻干燥机将液态dsRNA制成干粉状与书虱饲料按1:10混合；通过饲喂法将嗜卷书虱SOD1基因沉默，使嗜卷书虱抵抗逆境的能力降低，可一定程度上辅助实现嗜卷书虱生态调控。本发明设计新颖、合理，解决了书虱RNA干扰技术难的问题，本发明能够将嗜卷书虱的SOD1基因沉默，沉默效率在48h，可高达95％。嗜卷书虱RNA干扰技术的攻克，为以后书虱的生态调控技术的制定和功能基因的研究提供了新的思路。

技术领域

本发明涉及植物保护和生物技术领域，尤其涉及一种嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法。

背景技术

嗜卷书虱(Liposcelis bostrychophila)隶属于啮虫目(Psocoptera)，书虱科(Liposcelididae)，书虱属(Liposcelis)，是世界范围内广泛发生并造成严重损失的一种储藏物害虫。嗜卷书虱不仅直接取食储藏物，而且还可以携带、传播病菌和引起过敏反应，直接危害人们的身体健康。由于其具有取食范围广、活动能力强、繁殖率高和孤雌生殖等特点，在防治上长期不合理地使用化学药剂，使其对多种储粮保护剂及熏蒸剂产生了较高的忍受力或抗药性，其防控难度很大。超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，简称SOD)是一种能够催化超氧化物通过歧化反应转化为氧气和过氧化氢的酶。它广泛存在于各类动物、植物、微生物中，是一种重要的抗氧化剂，能够增强生物抵抗逆境的能力。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA，double-stranded RNA)引发的其所对应序列mRNA特异性降解的转录后基因沉默现象，它是沉默目的基因表达的一种有效手段。由于使用RNAi技术可以特异性抑制特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能、基因治疗以及害虫防控等领域。

目前许多重要害虫RNA干扰技术体系已经构建，如微量注射法和饲喂法。但由于书虱个体微小(体长约1mm)、体柔软，无法进行常规注射dsRNA的方法，其体极易破裂，造成试虫损伤甚至死亡；其次，书虱饲料必须为干粉状，现实中无法将液态dsRNA和饲料进行混合。因此有必要针对嗜卷书虱建立相应的RNA干扰技术体系，进而为其基因功能的研究和防治提供新思路。

综上所述，成功应用于其他昆虫的RNA干扰技术体系难以应用于嗜卷书虱等微小仓储书虱中。如何寻求一种高效的dsRNA递送方式成为急待解决的问题。本发明关键在于将液态dsRNA固态化，并按1:10的比例与书虱人工粉末状饲料混合，成功构建了一种嗜卷书虱RNA干扰的技术体系。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法。

本发明是这样实现的，一种嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法，所述嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法基于嗜卷书虱SOD1基因，合成特异dsRNA，利用冷冻干燥机将液态dsRNA制成干粉状与书虱饲料按1:10混合；通过饲喂法将嗜卷书虱SOD1基因沉默。

进一步，所述嗜卷书虱SOD1基因的RNA干扰方法包括以下步骤：

步骤一，干燥器底部加饱和食盐水调节湿度，保持相对湿度在75％～80％；放置直径2.5cm、高1cm塑料培养盒，每盒150头嗜卷书虱成虫；人工气候培养箱内控制24h黑暗条件，温度设定为27.5℃；饥饿处理24h；

步骤二，将全麦粉、酵母粉、脱脂奶粉三种原料按照10:1:1混合并搅拌均匀；

步骤三，取30mg dsRNA，2μl的溴酚蓝，加RNase-free H₂O补足至200μl后振荡混匀离心；混合液加入一次性灭菌培养皿，置于-80℃冰箱冻成固体状；将培养皿放入冷冻干燥机，密闭完毕后处理24h；