[发明专利]一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法

说明书

一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法，包括以下步骤：a)清洗鱿鱼皮，沥干水分，匀浆后按一定的料液比加入去离子水，搅拌均匀，并调节pH值到7.5～8.5；b)加入鱿鱼皮质量0.4～0.6％的蛋白酶，混匀后在50～60℃条件下水解80～100min，得到鱼皮酶解液；c）超滤：将鱼皮酶解液加入超滤系统，用10KD、5KD、3KD的超滤膜进行超滤，收集>10KD、10‑5KD、5‑3KD和<3KD分子量的酶解液；d）将酶解液用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析和缓冲液洗脱，收集各峰后，取有生物活性的峰再用反相高效液相色谱(RT‑HPLC)纯化；e）经过反相高效液相色谱(RT‑HPLC)纯化及氨基酸序列检测，获得小分子胶原低聚十肽的胶原蛋白粉产品。

技术领域

本发明涉及的是一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法，属于生物技术中的蛋白质材料领域。

背景技术

胶原蛋白是一种糖蛋白，分子含糖及大量甘氨酸、脯氨酸、轻脯氨酸等，是体内含量最多的一类蛋白质，也是结缔组织极其重要的结构蛋白质，细胞间质最重要的功能蛋白。生物活性多肽在人体内含量极少，但生物活性极高，具有多种重要的生物学效应和生理功能，被称为“皮肤软黄金”，可见其在化妆品中所起到的重要作用。鱿鱼皮胶原蛋白多肽不仅有抗衰老作用，而且它的高度可溶性、亲水性、乳化性以及组织相容性等性质，使得它对皮肤有很好的滋润和修复作用，能促进人皮肤成纤维细胞胶原和透明质酸的生成、改善皮肤弹性的作用，成为美容界流行和推崇的护肤品原料。

随着我国远洋鱿钓业的迅速发展，鱿鱼产量迅猛增加，成为我国重要的海洋经济头足类动物和主要的水产品加工原料。鱿鱼年加工量为30～40万t，其中鱿鱼皮占加工量的8%～10%，浙江省是产鱿鱼的大省。鱿鱼皮中胶原蛋白含量较高，约占干重的80%，如果不对其进行进一步加工处理利用，不仅造成资源的极大浪费，更严重的是直接导致环境的污染。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种制备工艺简单，成本低，制备效率高，能够有效节约渔业资源，减少环境污染的鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种鱿鱼皮小分子胶原蛋白粉制备方法，包括以下步骤：

a) 清洗鱿鱼皮，沥干水分，匀浆后按一定的料液比加入去离子水，搅拌均匀，并调节pH值到7.5～8.5 ；

b) 加入鱿鱼皮质量0.4～0.6％的蛋白酶，混匀后在50～60℃条件下水解80 ～100min，得到鱼皮酶解液；

c）超滤：将鱼皮酶解液加入超滤系统，用10KD、5KD、3KD的超滤膜进行超滤，收集&gt;10KD、10-5KD、5-3KD和&lt;3KD分子量的酶解液；

d）将酶解液用葡聚糖凝胶Sephadex G25进行凝胶柱层析和缓冲液洗脱，收集各峰后，取有生物活性的峰再用反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化；

e）经过反相高效液相色谱(RT- HPLC)纯化及氨基酸序列检测，获得小分子胶原低聚十肽的胶原蛋白粉产品。

作为优选：所述的步骤d）中，所述的凝胶柱层析和缓冲液洗脱是：PH8.5Tris-HC1缓冲液，0 ～ 0.03mol/NaCl 梯度洗脱，收集有活性的各峰，冻干后，凝胶柱脱盐；

所述的步骤e）中，所述反相高效液相色谱(RT- HPLC)：即用RT-HPLC进行纯化，色谱条件:

1)样品前处理:将样品用0.06%TFA的水溶解到0.6ml，离心（12000-14000RPM，离心10分钟）取上清；

2)系统: Agilent 1260 HPLC；

3)柱子:ZorbaxSB-C18 4.6X250 5um；