[发明专利]一种PEDV保护性抗原蛋白及其在乳酸菌中表达的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种PEDV保护性抗原蛋白及其在乳酸菌中表达的方法。含PEDV保护性抗原蛋白包含S1P1、S1P2、S1P3、SS5和SS6表位的PEDV保护性抗原位点片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还提供了一种含PEDV保护性抗原蛋白在乳酸菌中表达的方法，其能在乳酸菌中很好地诱导表达出PEDV保护性抗原蛋白，为今后乳酸菌口服疫苗的研究奠定基础。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种PEDV保护性抗原蛋白及其在乳酸菌中表达的方法。

背景技术

猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的猪流行性腹泻在世界范围内广泛存在。各种年龄的猪均易感，对哺乳仔猪危害更大，发病率可达80％-100％，发病猪临床表现特征主要为腹泻、呕吐和脱水。前期，预防主要依靠经典的基于CV777毒株的疫苗，能够基本满足临床的要求。然而，2010年10月，中国南部地区爆发严重的猪流行性腹泻疫情，研究发现，病毒发生了变异，出现了高毒力的G2型PEDV毒株，随后国内多个地区均爆发了该疫情；与此同时，美国也于2013年4月出现了高毒力PEDV的报道，截止到2015年3月中旬，疫情已扩散至美国36个州。可见，高毒力PEDV变异株的出现给国内外的养猪业造成了极大的经济损失。

基于此，研究能够用于G2型PEDV毒株预防的疫苗显得尤为重要。随着基因工程技术的发展，研究人员使用多种表达系统尝试研发新型基因工程疫苗。其中乳酸菌表达系统，由于乳酸菌是人和大多数动物肠道内的常见细菌，同时已经有研究表明利用乳酸菌表达抗原也能诱导机体产生免疫应答，然而，PEDV保护性抗原基因片段在乳酸菌中不表达或表达量低。因此利用乳酸菌表达系统进行新型基因工程疫苗的研究尤其是肠道病原疫苗的研究是研究的热点方向之一。

发明内容

为解决现有技术的上述技术问题，本发明提供一种含PEDV保护性抗原蛋白，还提供了一种能将PEDV保护性抗原蛋白在乳酸菌中表达制备的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下的技术方案为：

一种PEDV保护性抗原蛋白，所述保护性抗原蛋白包含S1P1、S1P2、S1P3、SS5和SS6表位的PEDV保护性抗原位点片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

用于编码如上所述PEDV保护性抗原蛋白的基因，优选地，所述基因的序列如SEQID NO.2所示的核苷酸序列。

一种含PEDV保护性抗原蛋白的乳酸菌表达载体，所述乳酸菌表达载体含有如SEQID NO.2所示的核苷酸序列。

优选地，所述乳酸菌为乳酸乳球菌。

一种PEDV保护性抗原蛋白在乳酸菌中表达的方法，包括如下步骤：

S1、将编码PEDV保护性抗原蛋白如SEQ ID NO.1所示氨基酸的核苷酸序列连接到质粒pNZ8149载体上，得到连接产物；

S2、将所述步骤S1中连接产物转化乳酸乳球菌感受态细胞中，得到乳酸乳球菌重组菌；

S3、将所述步骤S2中乳酸乳球菌重组菌进行诱导表达。

如上所述的表达方法，优选地，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

如上所述的表达方法，优选地，所述步骤S1的操作步骤为：对如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列和质粒pNZ8149载体进行双酶切，所述双酶切用Nco I和Sac I，之后用T4连接酶进行连接，得到连接产物。

如上所述的表达方法，优选地，在所述步骤S2中，所述乳酸乳球菌感受态细胞为NZ3900菌株；所述转化采用电击法，条件为脉冲为25μF、电压2000V、电阻200Ω。