[发明专利]一种固相合成Etelcalcetide的方法

说明书

本发明涉及医药合成领域，公开了一种固相合成Etelcalcetide的方法。本发明先合成Etelcalcetide主链肽序2‑7位的肽树脂，然后采用全保护的D‑半胱氨酸衍生物Ac‑D‑Cys[R1‑Cys‑OR2)]与所述肽树脂偶联，采用适宜的酸解液进行酸解，合成得到Etelcalcetide，最终所获得的Etelcalcetide具有较高的纯度和总收率。

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种固相合成Etelcalcetide的方法。

背景技术

Etelcalcetide是一种拟钙剂，这款药物旨在通过激活甲状旁腺上的钙敏感受体来模拟钙的行为,Etelcalcetide以静脉注射使用，它可以与甲状旁腺上的钙敏感受体结合并将其激活，然后降低甲状旁腺素的水平,临床用于慢性肾病透析患者的继发性甲状旁腺机能亢进。

Etelcalcetide具有以下的结构：

Ac-D-Cys(Cys)-D-Ala-D-Arg-D-Arg-D-Arg-D-Ala-D-Arg-NH2

目前，关于Etelcalcetide的报道还较少，中国专利CN201511029990.2报道的制备方法，采用固相合成主链，再进行侧链二硫键修饰；CN201511030047.3报道的制备方法，采用液相法合成主链，再进行侧链二硫键修饰；但是两者在粗肽纯度以及精肽总收率上还存在一定不足。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种固相合成Etelcalcetide的方法，使得本发明所述方法具有较高的粗品纯度、成品纯度以及总收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种固相合成Etelcalcetide的方法，包括：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列D-Arg侧链上偶联有保护基，且在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端偶联有氨基树脂的肽树脂；

步骤2、步骤1所述肽树脂N端与Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]的C端偶联，获得Etelcalcetide树脂；其中，所述R1为Boc或Fmoc，R2为All或tBu；

步骤3、所述Etelcalcetide树脂经由TFA、EDT和水组成的混合酸解液酸解，获得Etelcalcetide粗品；

步骤4、所述Etelcalcetide粗品纯化后获得纯品。

其中，Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]结构式如下：

SEQ ID NO:1所示氨基酸序列为Etelcalcetide主肽链2-7位的氨基酸序列

Ac-D-Cys¹(Cys)-D-Ala²-D-Arg³-D-Arg⁴-D-Arg⁵-D-Ala⁶-D-Arg⁷-NH₂

本发明所述方法直接采用全保护的Ac-D-Cys[R1-Cys-OR2)]，而后再与其他逐一偶联的肽树脂偶联，最后采用适宜的酸解液一并裂解，使最终所获得的Etelcalcetide具有92％以上的粗品纯度，并在纯化后具有较高的纯度和总收率。

本发明所述保护基是在氨基酸合成领域需要保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧、巯基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基、巯基等在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，如本发明使用Pbf保护基为Arg侧链的保护基。被保护基保护的氨基酸统称为保护氨基酸。