[发明专利]用于转基因番木瓜YK16-0-1转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明提供一种用于检测转基因番木瓜YK16‑0‑1转化体纯杂合的引物组，属于生物技术领域。所述引物组包括以下三条引物：1601‑GF：5’‑AGAGAACATCTGGTGGTATC‑3’，1601‑TR：5’‑CTCATTAAACTCCAGAAACC‑3’，1601‑GR：5’‑AGACATATATCATCAAGACCATAGTAG‑3’。本发明还提供基于上述引物组的试剂盒、检测方法。本发明所提供的引物组可检测待测番木瓜个体材料中是否含有YK16‑0‑1转化体，并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态，适合于纯合度检测和育种选种。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种用于转基因番木瓜YK16-0-1转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

转基因番木瓜是目前我国种植的两种主要转基因作物之一，2016年我国转基因番木瓜种植面积为8550公顷，比2015年的7000公顷增加了22％。

转基因番木瓜YK16-0-1是1996年叶东锡等人将番木瓜环斑病毒(PRSV)的外壳蛋白基因通过农杆菌介导的方法导入到番木瓜基因组中所获得的，能够产生对番木瓜环斑病毒的良好抗性。2012年对深圳市市售的转基因番木瓜检测表明，57份番木瓜样品中，转基因阳性率为91.2％，其中，YK16-0-1品系占96.1％。说明在我国转基因番木瓜中YK16-0-1转化体已有较大范围的种植和销售。

转基因性状与其他生物性状一样，可以根据其自交或杂交产生后代中的分离情况来判定其是纯合或杂合。在育种过程中，获得纯合体是一个非常关键的步骤，也是保证种子质量的重要的因素。传统的区分转基因植株纯杂合方法是通过检测自交产生的子一代是否发生分离以及计算分离比进行的，不仅耗时费力，而且浪费了子一代的宝贵资源。而快速高效地筛选纯合植株，可显著加快转基因植株的育种进程，因此鉴别转基因植株纯杂合方法具有重要的应用价值。

本领域亟需开发一套可快速、高效、便捷地鉴定筛选转基因番木瓜YK16-0-1纯杂合的方法。

发明内容

鉴于本领域存在的上述问题和需求，本发明分析了YK16-0-1转化体插入位点的番木瓜基因组序列，设计和验证了特异性的引物组合，建立了快速鉴定YK16-0-1转化体纯杂合的方法，可检测待测番木瓜材料是YK16-0-1转化体，并鉴别出特定个体的纯杂合状态。

本发明提供的技术方案如下：

用于番木瓜YK16-0-1转化体纯杂合鉴定的引物组，其特征在于，包括以下三条引物：

1601-GF：5’-AGAGAACATCTGGTGGTATC-3’，

1601-TR：5’-CTCATTAAACTCCAGAAACC-3’，

1601-GR：5’-AGACATATATCATCAAGACCATAGTAG-3’。

用于番木瓜YK16-0-1转化体纯杂合鉴定的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物组。

所述试剂盒还包括用于进行PCR扩增的常规试剂，和/或，用于进行电泳检测的常规试剂。

所述用于进行PCR扩增的常规试剂包括：dNTP、DNA聚合酶、PCR缓冲液、超纯水，或包含上述物质的商品化PCR反应混合液；所述用于进行电泳检测的常规试剂包括：电泳缓冲液、核酸染料、琼脂糖凝胶；

所述用于进行电泳检测的常规试剂还包括DNA Marker；所述核酸染料指溴化乙锭；所述商品化PCR反应混合液指Go GreenMaster Mix。

用于番木瓜YK16-0-1转化体纯杂合鉴定的方法，其特征在于，包括：采用所述的引物组，和/或，所述的试剂盒对待测番木瓜材料的DNA进行PCR扩增。