[发明专利]一种核酸提取方法

权利要求书

1.一种核酸提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、样品的裂解：取核酸样品置于反应器中，向反应器中加入裂解液A，开启搅拌套，于30～50℃，搅拌10～20min，再将反应器的温度升至50～70℃，向反应器中加入裂解液B，继续搅拌10～20min，得混合液A；

S2、磁珠的吸附：将带有磁珠的磁棒置于装有混合液A的反应器中，在搅拌套的搅拌作用下混合物A中的核酸吸附在磁棒上；

S3、清洗和洗脱：将磁棒升起，弃去反应器中的液体，再向反应器中加入清洗剂，然后将磁棒恢复原位，再进行搅拌，重复升起磁棒、弃去液体、加清洗剂、恢复磁棒、搅拌的操作2～3次，再将磁棒升起，弃去反应器中的液体，向反应器中加入洗脱剂，进行核酸的洗脱；

S4、核酸的预处理：将洗脱后的核酸进行末端修复、3’末端加A、接头连接、亚硫酸氢盐处理、PCR扩增，然后进行上机测试，完成核酸的提取。

2.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述裂解液A为7.5mol/L的盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素或二硫苏糖醇中任意一种的水溶液，且裂解液A的质量浓度为40％～45％，所述裂解液A的加入量为样品质量的10～12倍。

3.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述裂解液B为蛋白酶K、Tris-HCl溶液和水的混合物，所述裂解液B中蛋白酶K的质量浓度为8％～12％，所述Tris-HCl溶液的pH值为7.5、浓度为50mmol/L，所述裂解液B的加入量为样品质量的6～7倍。

4.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述裂解液A与核酸样品的反应温度为35～45℃。

5.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述裂解液B与核酸样品的反应温度为55～65℃。

6.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述磁珠为以超顺磁性氧化铁为核心外部包覆二氧化硅的微球，根据需要还可以在微球外包覆氨基或羧基达到特异性要求。

7.根据权利要求1所述的一种核酸提取方法，其特征在于，所述PCR扩增后还可以进行酶切、3’末端加A、测序接头连接、第二次PCR扩增再进行上机测试。