[发明专利]基于探针导向的重组酶介导的等温扩增法检测SNP位点用探针和试剂盒

权利要求书

1.一种基于探针导向的重组酶介导的等温扩增法检测SNP位点的探针和上游引物组合，所述探针和上游引物组合由一条上游引物和一条探针组成；所述探针的长度为46~52nt，其中SNP位点后一位碱基或SNP位点互补碱基的后一位碱基被四氢呋喃替代，探针的5’端距四氢呋喃位点至少间隔30个碱基，3’端距四氢呋喃位点至少间隔15个碱基；所述探针修饰有荧光基团和猝灭基团，所述荧光基团修饰在四氢呋喃位点3’端的T碱基上，所述猝灭基团修饰在SNP位点的5’端T碱基上或SNP位点互补碱基的5’端T碱基上；荧光基团修饰的T碱基与猝灭基团修饰的T碱基间隔2~5个碱基。

2.根据权利要求1所述的探针和上游引物组合，其特征在于，所述探针的荧光基团修饰在四氢呋喃位点的下一位T碱基上。

3.根据权利要求1所述的探针和上游引物组合，其特征在于，所述探针的猝灭基团修饰SNP位点的上一位T碱基上或SNP位点互补碱基的上一位T碱基上。

4.根据权利要求1所述的探针和上游引物组合，其特征在于，所述探针的荧光基团包括6-羧基荧光素或六氯-6-甲基荧光素；所述猝灭基团包括黑洞猝灭基团。

5.根据权利要求1所述的探针和上游引物组合，其特征在于，所述探针的3’末端碱基由磷酸盐阻滞剂修饰。

6.根据权利要求1~5任意一项所述的探针和上游引物组合，其特征在于，所述SNP位点为A或C；所述SNP位点互补碱基为T或G。

7.根据权利要求1~5任意一项所述的探针和上游引物组合，其特征在于，当检测SNP位点为MTHFR A1298C 侧翼序列时，所述探针包括两条，分别具有如序列表中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列和具有如序列表中SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

8.一种基于探针导向的重组酶介导的等温扩增法检测SNP位点的试剂盒，由以下成分组成：权利要求1~7任意一项所述的探针和上游引物组合、酶混合物、反应缓存液、280mmol/L醋酸镁；所述酶混合物包括800ng/μL 单链结合蛋白，60ng/μL 噬菌体UvsX蛋白，50ng/μL DNA 聚合酶和40ng/μL外切酶III。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述上游引物具有如序列表中SEQ IDNo.3所示的核苷酸序列。