[发明专利]一种LMP-2重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

说明书

本发明公开了一种LMP‑2重组腺相关病毒载体及其构建方法与其应用。该LMP‑2重组腺相关病毒载体是将腺相关病毒载体中的腺相关病毒结构基因替换为LMP‑2基因或其突变型基因得到的重组腺相关病毒载体。本发明的LMP‑2重组腺相关病毒载体可将其携带的野生型或突变型的LMP‑2基因输送入单核细胞‑巨噬细胞‑树突状细胞系中，携带有这些特异性抗原基因的细胞被用于刺激免疫系统的效应细胞。实验证明，被本发明的rAAV感染的DC所诱导的CTL在患者体内可有效地抑制恶性肿瘤细胞的生长或者杀灭肿瘤细胞，因而，本发明的LMP‑2重组腺相关病毒载体或与本发明LMP‑2重组腺相关病毒载体相关的产品可被用于制备抗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于及载体及其应用，具体涉及一种LMP-2重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用。

背景技术

腺相关病毒(AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ,Srivastava A,Berns KI,Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids:genecorrection within the terminal repeats of AAV.Cell.33:135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL,LabowMA,Wright R,Berns KI,Muzyczka N.Genetics of adeno-associated virus:isolationand preliminary characterization of adeno-assoc iated virus type 2mutants.JVirol.51:329-339.Hermonat,P.L.,and Muzyczka,N.Use of adeno-associated virusas a mammalian DNA cloning vector:trans duction of neomycin resistance intomammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。1986年，Labow等人鉴定了位于上游5’端片段和rep基因之间的p5启动子(Labow MA,HermonatPL,Berns KI.Pos itive and negative autoregulation of the adeno-associatedvirus type 2genome.J Virol.160:251-258.)。

1984年，美国博沃基因国际有限公司的主要技术技术负责人之一PaulL.Hermonat教授率先证明AAV载体可用于人类疾病的基因治疗(Hermonat,P.L.,andMuzyczka,N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA clonin g vector:transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6466-6470.)。目前，主要是欧美国家在进行以AAV为基础的基因治疗人类疾病的临床试验。据美国粮食和药品管理局统计，现有十余项以AAV为基础的基因治疗临床试验正在进行，主要是将携带治疗基因的AAV病毒注入患者体内，使其在体内表达治疗基因，从而达到治疗疾病的目的。主要针对治疗的疾病有帕金森氏综合症、风湿性关节炎、血友病、心力衰竭、进行性肌萎缩和奥兹海默综合症等非肿瘤性疾病。但是，应用于临床治疗的AAV病毒仍存在一些问题，例如携带治疗基因大小受到明显限制，病毒本身不稳定，导致治疗基因表达不稳定，以及造成疗效不一致。虽然AAV病毒本身的免疫原性很弱，但所表达的治疗基因容易在患者体内诱发自身免疫反应，甚至导致严重的毒副作用。