[发明专利]一种黑腹果蝇RasV12

说明书

本发明公开一种黑腹果蝇Ras^V12;Snail肿瘤迁徙模型的建立方法，采用特定的果蝇品系进行杂交后培养并筛选获得黑腹果蝇Ras^V12;Snail肿瘤迁徙模型；本发明方法构建的黑腹果蝇Ras^V12;Snail肿瘤迁徙模型，研究者可利用此模型进行大规模的遗传筛选，寻找抑制肿瘤迁移的基因突变或RNAi，阐明其调控肿瘤迁移的分子机制，并在哺乳动物细胞中对其同源物进行功能验证，以期为癌症的临床治疗提供新的药物靶点和治疗方案。

技术领域

本发明属于生物遗传学技术领域，具体涉及一种黑腹果蝇Ras^V12;Snail肿瘤迁徙模型的建立方法。

背景技术

果蝇遗传学操作系统，有Gal4/UAS双表达系统和FLP/FRT系统。其中，（一）Gal4/UAS双表达系统：Gal4/UAS系统是果蝇中最为常用的转基因技术体系，可以让外源基因或RNAi在特定细胞或组织选择性表达。半乳糖调节上游启动子元件（galactose-regulatedupstream promoter element 4），缩写Gal4，是酵母中类似于原核生物乳糖操纵子的一个转录激活子。上游激活序列UAS（upstream activate sequense），是酵母中另一种类似高等真核生物增强子的序列。Gal4通过与UAS相结合，调节与半乳糖代谢相关基因的表达。1993年，科学家将目的基因X连接在UAS之后，通过转基因技术建立UAS-X果蝇品系，然后与特定的Gal4果蝇品系杂交，在后代中就可以得到同时具有Y-Gal4和UAS-X的果蝇，从而实现特异性的在Y组织表达X基因（参考文献1，Brand A. H. and Perrimon N., Targeted geneexpression as a means of altering cell fates and generating dominantphenotypes. Development, 1993, 118: 401-15）。因为果蝇基因组不编码Gal4转录因子，所以在果蝇体内过量表达Gal4，不会对果蝇的发育产生显著的影响。同样，在果蝇体内插入UAS调控序列，也不会对果蝇产生影响。这个系统的建立为利用果蝇作为研究模型的科学家在实验设计上提供了有利、便捷、高效的遗传操作工具。Gal4/UAS双表达系统示意图如图1所示。

（二）FLP/FRT系统：FLP是酵母中的一种重组酶，它可以识别两个700bp的同源靶位点FRT (FLP recombination targets，FRTs)，如果两个FRT片段位于果蝇一对同源染色体的相同位点，热击诱导的FLP表达可以介导这两个位点进行有丝分裂重组，产生重组远端纯合的子细胞 (图2)（参考文献2，Zhang S. P. and Xue L., [Progress on cell lineageanalysis in Drosophila melanogaster]. Yi Chuan, 2012, 34: 819-28）。研究发现FRT介导的有丝分裂重组效率远高于其他方式，重组发生的位点也可以人为控制。此外，热击对细胞的伤害也较小。因此，研究者可以通过FLP/FRT技术探究少量基因改变的细胞在野生型细胞环境下的生长情况，从而进一步研究细胞竞争的分子机制。FLP/FRT系统作用原理示意图如图2所示。