[发明专利]一种抗CA125糖类抗原的纳米抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗CA125糖类抗原的纳米抗体，所述纳米抗体具有独特的3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3，本发明还公开了所述纳米抗体在制备肿瘤治疗药物和肿瘤诊断试剂中的应用。本发明提供的抗CA125纳米抗体对CA125具有高度特异的识别和结合能力，并且对卵巢癌细胞具有显著的ADCC效应，而且可以在小鼠体内实现肿瘤的精确成像。

技术领域

本发明公开了一种抗体，更具体地，本发明公开了一种纳米抗体。

背景技术

CA125卵巢癌相关抗原发现于1981年，是卵巢上皮性类癌的相关性抗原。由胚胎期上皮细胞分泌，正常情况下不分泌或极少分泌，但是当卵巢发生恶性病变时，即使临床上没有表现或病理上难以识别时，CA125值也会升高，因而是较好的卵巢癌诊断及筛查指标，并与卵巢癌的转移及预后有密切关系。最初是由Bast等通过卵巢细胞系OVCA433免疫原，介导鼠源性单克隆抗体OC125应答，继而识别并确认其存在。CA125抗原为分子质量达200ku的糖蛋白，兼有膜结合型与游离型两种态性，是迄今为止，研究最全面的卵巢癌血清标志物之一。90％进展期卵巢癌患者血清CA125浓度呈不同程度升高。

尽管卵巢癌患者首选手术或化疗等方法，但其预后仍不十分理想。肿瘤复发，尤其是腹腔内复发，以及化疗耐药，往往是影响预后的重要因素。目前，卵巢癌新的治疗方案，特别是生物治疗技术发展迅速，且已部分应用于离体和体内研究及临床试验中。卵巢癌生物治疗包括细胞因子、单克隆抗体、转基因疗法等多种形式。在诸多途径中，卵巢癌相关抗原CA125单克隆抗体疗法较为引人瞩目。目前CA125单克隆抗体治疗卵巢癌的技术包括抗原抗体复合物介导人体免疫应答和放射性元素与抗肿瘤药物靶向性诱导两类。抗原抗体复合物介导免疫是依靠激发机体内源性抗肿瘤反应，达到清除病灶、自我修复调控的目的。应用于该技术中最具代表性的抗体为抗CA125/抗T细胞表面分子双特异性抗体(BsAb)和鼠源性单克隆抗体B43.13。抗CA125/抗T细胞表面分子双特异性抗体通过与卵巢癌细胞表面CA125抗原结合，继而以抗T细胞表面分子表位识别诱导T细胞，产生T细胞针对肿瘤组织的细胞毒作用，将病灶杀灭。除此之外，该疗法还能激发机体自身产生和维持较长时间的主动免疫状态。目前抗CA125/抗T细胞表面分子BsAb虽然表现出优异的治疗效果，但是仍有较多问题亟待解决，比如详细的体内药物代谢动力学特征尚不明确；预判其体内应用剂量和激活T淋巴反应后细胞毒作用程度较困难；制备工艺人源化水平较低且毒副反应较明显；BsAb、肿瘤及T淋巴细胞的特异性和亲和力方面均需进一步提高；抗体Fc片段功能仍需改良；抗体肿瘤组织渗透性不高，由此带来了体内肿瘤定位不强、非目的清除率较高的技术问题。鼠源性单克隆抗体B43.13则通过结合CA125抗原形成免疫复合物，启动经典的独特型免疫应答。其作用机制为人源抗鼠抗体激活抗独特型链式反应，进而引起针对CA125的多克隆抗体体液免疫应答。此免疫应答疗法耐受性好，无不良反应或非依从等暂停用药情况，但无法始终保持人体对肿瘤细胞的敏感应答状态，亦不能克服肿瘤免疫逃逸机制。放射性元素与抗肿瘤药物靶向性诱导技术是另外一种CA125单克隆抗体治疗技术。卵巢癌肿瘤细胞减灭术后，残留癌细胞仍在腹腔内种植。一般情形下，这类种植细胞或细胞簇临床不易发现，化疗耐药率高，但其在放射免疫破坏下却相当脆弱。基于该特点，卵巢癌放射免疫疗法发展迅猛。目前的放射免疫疗法主要选择含抗CA125表位的鼠源性单克隆抗体，同位素标记后，靶向定位及放疗。多项试验证实，放射元素标记后，CA125单克隆抗体与其抗原的亲和性并不减弱。然而，传统的单克隆抗体直接放射标记法缺陷较多，尤其是网状内皮系统中放射毒性蓄积及实体瘤疗效欠佳。网状内皮系统蓄积，极大地削弱了同位素标记抗体靶向定位率。至于实体瘤放射免疫疗效欠佳，一般归咎为肿瘤组织摄取浓度低于最适放疗浓度，血浆清除率低及骨髓毒性等。

基于CA125在临床诊断方面所表现出的突出特性以及在肿瘤治疗领域的巨大应用前景，研发出针对CA125的特异性结合抗体，改善临床诊断和治疗效率成为现有技术的迫切需求。但是基于传统抗体的一些缺点，例如亲和力不高，免疫识别效率低下，对于一些隐蔽程度较高的抗原难以达到理想的结合和中和效果。