[发明专利]一种颗粒计数微粒标准物质的定值方法

说明书

本发明提供了一种颗粒计数微粒标准物质的定值方法，所述方法采用经预处理的混合纤维素酯网格滤膜或聚四氟乙烯网格滤膜制备样片，并结合显微镜直接计数的方法来对颗粒计数微粒标准物质进行定值。经测定本发明的定值方法准确可靠，切实可行。该定值方法操作简便、准确度高、可实现微粒浓度低于10⁷个/mL的样品的精确定值。

技术领域

本发明涉及粒度标准物质技术领域，特别涉及一种颗粒计数微粒标准物质的定值方法。

背景技术

微粒分析仪、库尔特颗粒计数及粒度分析仪等可用于颗粒计数的仪器，都需要用颗粒计数微粒标准物质定期进行标定。流式细胞仪在进行细胞计数时，需要使用荧光颗粒计数微粒标准物质作为检测的内参。因此，颗粒计数微粒标准物质的准确定值成为颗粒计数仪器检测结果准确与否的关键。

通常，颗粒计数微粒标准物质的定值使用血球计数板的计数方法，属于显微镜直接计数法。血球计数板有两种不同的规格，一种血球计数板的计数室有25个中格，每个中格有16个小格，共400个小格，总容积为0.1μL；另一种类型的血球计数板的计数室有16个中格，每个中格有25个小格，一样共400个小格，总容积也为0.1μL。血球计数板的测样体积都很小，0.1μL相当于将1mL待测样品稀释10000倍。颗粒计数微粒标准物质的定值，要求微粒达到1000个以上，否则可能会由于计数误差过大而引起定值结果不准确。人体血小板和白细胞计数用微粒标准物质的微粒浓度分别达到1.3×10⁷个/mL和1.6×10⁸个/mL，0.1μL中微粒数量大于1000个，因此可以采用血球计数板的计数方法直接进行定值。当微粒浓度≤10⁷个/mL时，0.1μL中微粒数量小于1000个，因此不适用于微粒浓度≤10⁷个/mL样品的定值。

近年来，随着科技的迅速发展，相关领域的科研与生产对较少微粒数的颗粒计数微粒标准物质有了越来越多的需求。因此，实现对微粒浓度低于甚至远低于10⁷个/mL的颗粒计数微粒标准物质的准确定值，具有非常重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种颗粒计数微粒标准物质的定值方法，该方法操作简便、准确度高、可实现微粒浓度低于10⁷个/mL的样品的精确定值。

本发明提供一种颗粒计数微粒标准物质的定值方法，所述的方法包括：

对待测溶液进行预处理；

对网格滤膜进行预处理，所述网格滤膜的孔径小于待测溶液中微粒的直径；

利用网格滤膜拦截一定体积的待测溶液中的微粒制备样片；

对样片进行显微镜计数；

根据显微镜计数结果计算待测溶液微粒浓度；

测定多次，取平均微粒浓度作为定值结果。

进一步地，所述待测溶液预处理方法包括：

在所述待测溶液微粒浓度≤2000个/mL时，采用超声处理使微粒分散；以及

在所述待测溶液微粒浓度＞2000个/mL时，将待测溶液稀释到微粒浓度≤2000个/mL，再采用超声处理使微粒分散。

进一步地，所述网格滤膜为混合纤维素酯网格滤膜或聚四氟乙烯网格滤膜中的一种。

进一步地，所述网格滤膜的预处理方法为将所述网格滤膜用异丙醇或丙三醇浸润。

进一步地，所述待测溶液中微粒的粒径为1μm～1000μm，所述网格滤膜的孔径为0.15μm～5μm。

进一步地，所述样片的制备方法包括：

将网格滤膜置于抽滤器上；