[发明专利]一种热稳定性提高的果聚糖蔗糖酶突变体

权利要求书

1.一种果聚糖蔗糖酶的突变体酶，其特征在于，是将来源于Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶的第404位的谷氨酸Glu替换成色氨酸Trp，所述突变体酶的氨基酸序列如SEQID No:4所示。

2.根据权利要求1所述的一种果聚糖蔗糖酶的突变体酶，其特征在于，编码所述果聚糖蔗糖酶的突变体酶的基因序列如SEQ ID No:3所示。

3.编码权利要求1或2所述突变体酶的基因。

4.携带权利要求3所述基因的质粒。

5.携带权利要求3所述基因的微生物细胞。

6.一种表达权利要求1或2所述突变体酶的重组大肠杆菌，其特征在于，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，转化重组表达质粒pET-22b(+)-E404W。

7.权利要求1或2所述突变体酶的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

(1)在Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶模拟结构的基础上确定突变位点；

(2)以重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS为模板，设计正向和反向引物，使用两步法对Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶进行定点突变，所述重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS的制备方法为：合成SEQ ID No:1所示的果聚糖蔗糖酶levan酶的基因片段BN1221_00994c，并连接至pET-22b(+)的酶切位点Nde I和Xho I之间，获得重组质粒pET-22b(+)-Brsp-LS；

(3)将构建成功的突变体质粒导入表达宿主E.coliBL21(DE3)，挑选验证后的阳性单克隆进行诱导表达培养；

(4)离心菌体，重悬后超声破碎，镍离子亲和层析纯化得到突变体酶E404W。

8.权利要求1或2所述突变体酶在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

9.权利要求4所述质粒在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

10.权利要求5所述微生物细胞在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。

11.权利要求1或2所述突变体酶在化学、食品和制药领域中的应用。

12.权利要求6所述重组大肠杆菌在制备果聚糖、葡萄糖或果糖中的应用。