[发明专利]蛋白核小球藻联合菌类产氢的方法

权利要求书

1.蛋白核小球藻（Chlorella pyrenoidosa）联合菌类产氢的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

步骤1）制备种子液：挑取蛋白核小球藻到盛有1L增殖培养基的培养瓶中，光照度150μmol·m^-2·s^-1，26℃培养，每天摇动培养瓶2-3次；培养3-4d得到处于对数生长期的种子液；

步骤2）制备藻液：将步骤1）所得种子液按照6-8%的接种量接种到TAP培养液中进行培养，控制光照强度为150μmol·m^-2·s^-1，光暗比为12h:12h，水温为26℃, pH为8，培养3-4d，得到藻液；

步骤3）制备复合菌液：将屎肠球菌(Enterococcus Faecium)和沼泽红假单胞菌(Rhodop seudanouas palustris)分别按照常规培养获得1×10⁸CFU/ml的种子液，然后按照1:2的体积比混合得到混合种子液，再按照10%的接种量转到发酵培养基中，30℃培养12h，得到复合菌液；

步骤4）制备改良TAP培养液：往TAP培养液中添加亚油酸甘油酯，所述亚油酸甘油酯的浓度为1-1.5mg/L，得到改良TAP培养液；

步骤5）联合产氢：将改良TAP培养液转移到反应器中，通入N₂保持厌氧环境；然后将步骤2）所得藻液按照6%的体积比接种到改良TAP培养液中，暗培养12h，然后将步骤3）所得复合菌液按照0.5-1%的体积比接种到改良TAP培养液中，联合产氢48h。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述增殖培养基每升含下述组分：葡萄糖3g，酵母粉1g，硝酸钠1g，亚硫酸钠1g，氯化钠0.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.2g，硫酸亚铁0.1g。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的配方按质量百分比为：糖蜜3%、玉米浆2.5％、豆粕2％、K₂HPO₄ 0.1％、KH₂PO₄ 0.1％、CaCO₃ 0.01％、FeSO₄0.005％、MnSO₄ 0.005％，余量为水，pH7.0。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述联合产氢条件为：光照强度为150μmol·m^-2·s^-1，光暗比为12h:12h。