[发明专利]一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物及检测方法在审
| 申请号： | 201810061953.7 | 申请日： | 2018-01-23 |
| 公开（公告）号： | CN108034757A | 公开（公告）日： | 2018-05-15 |
| 发明（设计）人： | 武国干;唐雪明;潘爱虎;孙宇;李鹏;吴潇;吕贝贝;蒋玮;王金斌 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 张晓敏;费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 转基因 玉米 bt11 品系 rpa 引物 方法 | ||
1.一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA引物，其包括正向引物F和反向引物R，具体序列如下：
F：5’-CTGGGAGGCCAAGGTATCTAATCAGCCATCCC-3’；
R：5’-CTGCTGTAGCTGGCCTAATCTCAACTGGTCTCC-3’。
2.一种用于检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的RPA引物。
3.根据权利要求2所述的RPA检测试剂盒，其特征在于，其包含RPA反应体系，该RPA反应体系中，各成分的终浓度为：RPA引物的正向引物、反向引物各为0.4-1.0μmol/L，且，正向引物、反向引物的比例为0.5-2：1，DNA模板100-1000ng/μL，醋酸镁10-16mmol/L。
4.一种检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，包括：
1)提取待测样品的DNA作为模板；
2)将权利要求1的RPA引物对加入到RPA扩增反应体系中，进行RPA扩增反应，扩增温度32-42℃，反应时间15～25分钟；
3)然后通过琼脂糖凝胶电泳，若得到片段大小为188bp的条带，则证明待测样品中含有转基因玉米Bt11品系。
5.根据权利要求4所述检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，其特征在于，进行RPA扩增反应时，所述RPA反应体系中，各成分的终浓度为：RPA引物的正向引物、反向引物各为0.4-1.0μmol/L，且，正向引物、反向引物的比例为0.5-2：1，DNA模板100-1000ng/μL，醋酸镁10-16mmol/L。
6.根据权利要求4所述检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，其特征在于，所述RPA反应体系总体积为50μL，其中，浓度为10μmol/L的RPA引物的正向引物、反向引物各加入2.4μL，浓度为100ng/μL的DNA模板加入1μL，TwistAmp
7.根据权利要求4所述检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，其特征在于所述步骤2)中，所述RPA扩增反应程序为：扩增温度35-40℃。
8.根据权利要求4所述检测转基因玉米Bt11品系的RPA检测方法，其特征在于，所述步骤2)中，RPA扩增反应程序为：37℃扩增20分钟。
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