[发明专利]提高安丝菌素P-3生产的方法

权利要求书

1.一种生物反应器中珍贵橙色束丝放线菌提高安丝菌素P-3产量的分批补料发酵工艺，其特征在于，基于野生型菌株珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565的共表达菌株Oasm13-17:asmUdpg划线YMG平板上常温培养至长出白色气生菌丝后移至种子培养基中摇床培养，然后取种子液并移至二级培养基中进行再次摇床培养后得到发酵种子液；最后将发酵种子液接种至含有发酵培养基的发酵罐中，通过动态补液实现优化发酵；

所述的动态补液是指：当发酵到48-60小时，发酵液中葡萄糖浓度低于1g/L，补加含葡萄糖或果糖625g/L，异丁醇85mL/L的母液20ml，补加后发酵液中的葡萄糖或果糖浓度达到2.5g/L，继续发酵培养并实时监测发酵液中果糖浓度，当发酵液中葡萄糖或果糖浓度低于1g/L时，继续补加含葡萄糖或果糖625g/L，异丁醇85mL/L的母液20mL，分别在发酵培养60h、96h和120h时补加，一共补加4次；

所述的共表达菌株Oasm13-17:asmUdpg，以珍贵橙色束丝放线菌ATCC31565基因组DNA为模板分别克隆和酶切后，连接至含有红霉素启动子permE*的pIB139载体上，得到共表达质粒pIB139-asm13-17:asmUdpg，将构建好的共表达质粒，通过结合转移转入ATCC31565菌株中得到。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的YMG平板上含有0.4wt％酵母粉、1wt％麦芽糖提取物、0.4wt％葡萄糖、0.03wt％氯化镁。

3.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的常温培养，为28℃下培养2-3天至长出白色气生菌丝。

4.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的摇床培养，为28℃、220rpm的摇床中培养24～40小时。

5.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的种子培养基每升中含有酵母提取物10g、牛肉浸膏10g、无水葡萄糖5g、甘油10g和氯化钠3g。

6.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的二级培养基与种子培养基组分相同。

7.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的接种，以1.5％-2％的接种量，接种到10L装有5L发酵培养基的发酵罐中。

8.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的发酵培养基每升中含有无水葡萄糖5g、甘油40g、酵母提取物10g、蔗糖2.5g、碳酸钙2g、磷酸氢二钾0.65g、七水合硫酸镁0.5g、七水合硫酸亚铁0.002g、碳酸钙0.5g以及异丁醇200μL/60mL。

9.根据权利要求1所述的工艺，其特征是，所述的发酵罐中采用0.1M的盐酸溶液和0.1M的氢氧化钠溶液控制pH值6.5～7.5之间。