[发明专利]一种胃癌新型分子标记物tRF-5026a的检测及应用

说明书

本发明涉及一种用于胃癌诊断的tRF分子标志物，其特征在于：该tRF为tRF‑5026a，本发明还提供一种检测胃癌tRF分子标志物的方法，包括如下步骤:(1)收集胃癌组织；(2)获得浓度纯度较高的RNA；(3)前处理并逆转录成cDNA；(4)进行荧光染料法qRT‑PCR检测；(5)tRF和外参基因采用特异性上下游扩增引物；(6)通过统计出胃癌组织中目的tRF和外参基因的Cq值；(7)采用ΔCq＝Cq_(targettRF)‑Cq_(reference)的计算方法对tRF进行相对定量，与现有技术相比，本发明的优点在于在胃癌组织中的特异性表达下调tRF‑5026a可作为胃癌诊断的新型分子标记物。

技术领域

本发明涉及一种胃癌组织中tRNA衍生片段的检测方法，尤其涉及一种荧光染料法实时定量逆转录-聚合酶链式反应检测胃癌组织中tRF的方法及其应用。

背景技术

全球癌症统计中，胃癌发病率列居前位，中国又是胃癌高发大国。尽管诊断技术在不断提高，以手术治疗为主的综合治疗手段越来越丰富，但胃癌依旧是全球主要癌症致死性疾病之一，每年约有100万个新发病例，死亡人数达到72万余人【赵倩，杨晓燕，甘润良.胃癌的分子分型研究进展.中华病理学杂志,2016,45(10):737-741】。中国是胃癌的高发国，每年我国新增约40万例胃癌患者，约占世界胃癌发病人数的42％。由于胃癌早期症状不明显，并且又缺乏特异的早期胃癌诊断方法【Liu X,Meltzer SJ.Gastric Cancer in theEra of Precision Medicine.Cell Mol Gastroenterol Hepatol,2017,3(3):348-358】，已有的肿瘤标志物如癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA)、糖抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9，CA19-9)等在胃癌中的检出率均不高。绝大多数胃癌患者在诊断时已处于晚期，使得患者的生存期较短【Chia NY,Tan P.Molecular classificationof gastric cancer.Ann Oncol,2016,27(5):763-9.】。因而寻找利于早期诊断和早期治疗的生物标志物一直是肿瘤研究的热点。随着分子生物学和分子诊断研究的深入，科学家逐渐将目光转向tRF，因其在抑癌与致癌途径中显露出的潜在作用而成为肿瘤研究的新热点。它们由成熟tRNA或前体tRNA在不同位点特异性剪切产生，是一类广泛存在于真核生物细胞中的非编码小RNA分子。tRF主要有tRF-5、tRF-3和tRF-1等3亚类，分别来自成熟tRNA的D环至反密码子环茎区间切割至5'端、T环开始至3'端和前体tRNA的3'端尾部，长度为14～30个核苷酸(nucleotide，nt)。tRF具有多种生物学功能，既可以在应激反应中作为信号分子，又可以作为基因表达的调节者。这些特点使得tRF在疾病诊断与治疗方法的开发应用上具有广阔的前景。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是，针对上述现有技术现状而提供一种tRF-5026a作为胃癌检测中的分子标记物，利用该分子标记物可以简单、快捷地进行胃癌诊断。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种在胃癌组织中检测tRF-5026a的方法。

本发明所要解决的又一个技术问题是针对上述现有技术现状而提供一种tRF-5026a在胃癌诊断中的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：该用于胃癌检测的tRF分子标记物，其特征在于：该tRF为tRF-5026a，其基因在基因组上的定位为：chr6-26538282-26538354，对应的tRNA为chr6.trna9-ValCAC，该tRF的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，为GTTTCCGTAGTGTAGTGG。

进一步地，所述tRF-5026a在胃癌患者癌组织中特异性表达水平下调。