[发明专利]CuO标记技术用于厚度可控蛋白质分子印迹膜的制备

说明书

本发明提供一种CuO标记技术用于厚度可控蛋白质分子印迹膜的制备，具体是将模板蛋白固定于96孔微板，接着通过控制聚合时间制备一层厚度可控的聚苯胺薄膜，用于印迹模板蛋白，模板蛋白经洗脱形成分子印迹膜，通过CuO NPs直接标记信号转换技术，对分子印迹膜识别的目标蛋白进行直接标记，被标记的CuO NPs的量与目标蛋白的浓度有直接关系，经转换成Cu²⁺可直接电化学分析，从而构建一种新型电化学仿生传感器。该厚度可控的印迹膜提供了一种高效，特异性和稳定的目标蛋白的识别元件，CuO NPs直接标记信号转换技术提供了一种便捷、高效、灵敏的检测方法。

技术领域

本发明涉及CuO标记技术用于厚度可控蛋白质分子印迹膜的制备，属于分子检测技术领域。

背景技术

分子印迹技术，是模拟自然界所存在的分子识别作用，制备包裹模板分子的聚合物网状结构的人工受体。所制备的聚合物称为分子印迹聚合物（Molecular imprintedpolymer, MIPs）。分子印迹聚合物是一种具有较强分子识别能力的新型高分子仿生材料。

传统的酶联免疫分析（ELISA）是将抗原或抗体结合到某种固相载体表面，利用其对目标物的特异性识别能力，采用酶标记技术进行信号的转换和放大，达到定性与定量分析的目的。如能将这种具有人工抗体性质的分子印迹材料与免疫技术相结合，将为生物分子分析提供一个全新的手段，而这一手段的优势在于对那些低丰度或难以获取抗体的生物分子可以实现直接的分析与检测，所消耗的模板分子量少，且有着比抗体更好的稳定性，如果设计一种单分子印迹层平铺于免疫板的底板上，一定程度上可以取代免疫分析中的抗体。

近年来，具有量子点效应和比表面积高等物化性质的金属氧化物，如铁氧化物（FeO，Fe₂O₃ 和Fe₃O₄），铜氧化物（CuO和Cu₂O）逐渐运用到分析化学领域中。

CuO NPs的粒径介于1-100nm，相较于普通的CuO，具有量子点效应和高的比表面积等特殊的物理化学性质，逐渐被引入到分析化学领域。CuO NPs成本低，合成步骤简单，物理及化学性质稳定，据文献报道，CuO NPs对生物样品具有较强的吸附能力，因此CuO NPs受到人们普遍的关注，并成为用途十分广泛的无机材料之一。

发明内容

本发明的目的是为了提供CuO标记技术用于厚度可控蛋白质分子印迹膜的制备，构建一种新型仿生传感器。该化学传感器提供了一种简单，特异性，灵敏和稳定的目标蛋白的识别与检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

CuO标记技术用于厚度可控蛋白质分子印迹膜的制备，是将模板蛋白固定于96孔微板，接着通过控制聚合时间制备一层厚度可控的蛋白质分子印迹膜，用于印迹模板蛋白，模板蛋白经洗脱形成分子印迹膜；通过CuO标记信号转换技术对分子印迹膜识别的目标蛋白进行直接标记，被标记的CuO NPs的量与目标蛋白的浓度有直接关系，经转换成Cu²⁺可直接电化学分析，从而构建一种新型电化学仿生传感器。

其中所述一种基于96孔板的蛋白质分子印迹膜的制备方法，具体步骤如下：

1）模板分子的固定：取洁净的96孔微型板，每孔加入50 μL 100 μg/mL的模板蛋白，适当的振晃孵育1小时。接着吸尽板孔中蛋白液体，加入100 μL超纯水清洗，每次浸泡5min，反复二次。

2）聚合物薄膜的制备：取一定浓度的苯胺作为功能单体，过硫酸铵APS为引发剂，苯胺与APS的摩尔比例为3∶1，在试剂管中先进行预聚合，以确保混合完全，并迅速加入板孔中，每孔加入80 μL，孵育一定时间，孵育过程可适当的振晃以避免聚合物分层，同时促进聚合完全，制成聚合物膜。反应过程中控制聚合时间，以制备符合要求的聚合物膜。