[发明专利]一种牛奶中A2-β-酪蛋白的分离方法

说明书

本发明公开了一种牛奶中A2‑β‑酪蛋白的分离方法，综合考虑了β‑酪蛋白的等电点、Ca²⁺离子敏感、低温低酸游离等特性，探索出A2‑β‑酪蛋白的提纯方法，能够快速分离富集得到纯度在85％以上的A2‑β‑酪蛋白，该方法不仅能够用于A2‑β‑酪蛋白的分离提纯，也能够用于A1‑β‑酪蛋白或者同时含有A1‑β‑酪蛋白和A2‑β‑酪蛋白的混合β‑酪蛋白的分离提纯，克服了现有技术中β‑酪蛋白分离时间长、步骤繁琐以及耗费高昂的问题，为检测乳制品中β‑酪蛋白种类提供了条件，而且工艺简单、成本低，适于大规模生产。

技术领域

本发明涉及分离提纯领域，具体涉及一种牛奶中A2-β-酪蛋白的分离方法。

背景技术

酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白质，占牛乳蛋白含量的80％左右。根据氨基酸组成和电泳行为的不同，酪蛋白可分为αs-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋白，其中β-酪蛋白约占牛乳酪蛋白总量的30-35％。β-酪蛋白又存在多种变体，最常见的是A1-β-酪蛋白和A2-β-酪蛋白，两者的区别在于氨基酸链的第67位存在变异，前者为组氨酸，后者为脯氨酸。研究发现，A1-β-酪蛋白在生物体内会水解产生β-酪啡肽(BCM-7)，该活性肽能够导致缺血性心脏病、动脉粥样硬化、I型糖尿病、新生儿猝死症及一些精神方面的疾病，因此含有A2-β-酪蛋白的乳制品更加健康安全，在国内外市场上也更受欢迎。

由于奶牛的基因决定了所产牛乳中β-酪蛋白是A1型或者A2型，所以目前主要通过牛只基因鉴定法来判断牛乳中β-酪蛋白的种类，该法不能判断未知奶牛基因型的牛乳样品。为了定性定量检测未知牛奶中β-酪蛋白的类型及其含量，首要的获得A2-β-酪蛋白，然而由于工艺或者成本等因素，市场上并没有售卖A2-β-酪蛋白的标准化商品，需要从A2型牛奶中分离制备。然而现有的分离纯化酪蛋白的方法不仅步骤繁琐、耗时长、花费高昂，而且对β-酪蛋白的分离纯化效果差。因此，迫切需要一种对牛奶中β-酪蛋白，尤其是A2-β-酪蛋白的高效便捷、廉价易行提纯分离方法。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明的目的就是提供简单、便宜的牛乳β-酪蛋白的分离方法。

本发明提供了一种A2-β-酪蛋白的分离方法，包括下述步骤：

1)将脱脂的A2型牛奶在25-35℃下碱调pH值到10.5-11.5；

2)在搅拌条件下向脱脂奶中加入钙盐，使脱脂奶体系中钙离子浓度在0.05-0.08mol/L，酸调体系pH值至中性，离心，保留沉淀；

3)用纯净水洗涤沉淀1-2次，向沉淀中加入pH值为10.5-11.5的碱溶液，并在2-4℃下冷冻搅拌2h，得到蛋白溶液；

4)酸调蛋白溶液pH值到4-5，在2-4℃下冷冻离心，收集上清液并转移至另一烧杯中，在25-35℃下保持25-35min，离心，保留沉淀；

5)洗涤沉淀，干燥后得到目标蛋白，并在-20℃冷冻保存目标蛋白。

优选的是，步骤1)中所述脱脂的A2型牛奶的制备方法：将A2型牛奶在2℃下冷冻离心，留取下层的脱脂奶。

优选的是，步骤1)中所述碱为1mol/L氢氧化钠溶液，碱调温度为30℃，碱调pH值到11。

优选的是，步骤2)中所述钙盐为0.5mol/L氯化钙溶液，脱脂奶体系中钙离子浓度为0.065mol/L；所述酸为1mol/L盐酸；所述离心时间10min，转速4000r/min。

优选的是，步骤3)中所述洗涤为向沉淀中加入纯净水并搅拌至呈乳浊液，将该乳浊液在4000r/min下离心10min，保留沉淀，即为固体蛋白。

优选的是，步骤3)中所述碱溶液的pH值为11，冷冻搅拌温度为2℃。