[发明专利]用于鉴别沙门氏菌和单增李斯特菌的检测分析方法

权利要求书

1.用于鉴别沙门氏菌和单增李斯特菌的检测分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)样品的制备：

选择对数期的沙门氏菌全细胞制备悬液，以转速3 000r.min-1离心分离湿菌体，以无菌水分三次洗涤沉淀部分，充分振荡摇匀使菌体分散开来，平板菌落计数法进行菌落计数，另用移液枪移取1mL菌液于大试管中，加入9mL无菌水，充分振荡摇匀形成10倍稀释菌悬液，然后逐级进行19次10倍稀释，制成一组20个浓度梯度的沙门氏菌全细胞悬液，浓度梯度值呈比差为10的等差序列，备用；一组20个浓度梯度的单增李斯特氏菌全细胞悬液的制备同沙门氏菌全细胞悬液制备过程；

用超声波细胞粉碎仪破碎沙门氏菌的全细胞，以转速15 000r.min-1离心分离，沉淀部分为细胞壁、上清液为细胞质，将细胞质悬液充分振荡摇匀，用移液枪移取1mL菌液于大试管中，加入9mL无菌水，充分振荡摇匀形成10倍稀释菌悬液，然后逐级进行19次10倍稀释过程，制成一组浓度梯度的沙门氏菌细胞质悬液，20个浓度梯度值呈比差为10的等差序列，备用；一组20个浓度梯度的单增李斯特氏菌细胞质悬液的制备同沙门氏菌细胞质悬液制备过程；

一组20个浓度梯度的沙门氏菌细胞壁悬液的制备同沙门氏菌细胞质悬液制备过程；一组20个浓度梯度的单增李斯特氏菌细胞壁悬液的制备同单增李斯特氏菌细胞质悬液制备过程；

(2)样品的测定：

采用近红外光谱仪对沙门氏菌、单增李斯特菌的各组分进行近红外光谱透射扫描；

(3)数据处理：

将处理后的光谱数据利用主成分分析法PCA法进行数据的处理，选取前两个主成分的得分值，并采用分析软件OPUS 6.5中主成分分析法对光谱数据进行分析。

2.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(1)中，沙门氏菌的平板菌落计数法进行菌落计数结果为80亿.mL-1；单增李斯特氏菌的平板菌落计数法进行菌落计数结果为175亿.mL-1。

3.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(1)中，沙门氏菌的全细胞的超声波破碎参数选为400W、破碎5s、间隔5s、实际破碎总时间50min。

4.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(1)中，单增李斯特氏菌的全细胞的超声波破碎参数为500W、破碎4s、间隔5s、实际破碎总时间50min。

5.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(2)中，采用完全相同的仪器参数对沙门氏菌、单增李斯特菌的各组分进行近红外光谱透射扫描，其中，将近红外光谱仪的分辨率设定为为4cm-1，扫描次数为64次，扫描范围4 000～12 000cm-1，环境温度控制在20℃，空气湿度为70％，数据格式为Log(1/R)，每个样品重复扫描3次，其平均值作为该样品的光谱数据，每张光谱包含2 075个波长点的吸光度。

6.根据权利要求1～5任一项所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(3)中，通过PCA分析，所述沙门氏菌全细胞的第一组分得分范围为-0.05～0.03，第二组分得分范围为-0.13～-0.02；所述单增李斯特菌的全细胞的第一组分得分范围为-0.09～0.04，第二组分得分范围为0.01～0.25。

7.根据权利要求1～5任一项所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(3)中，通过PCA分析，所述沙门氏菌的细胞壁的第一组分得分范围为-0.10～0.05，第二组分得分范围为-0.02～0.15；所述单增李斯特菌的细胞壁的第一组分得分范围为0.05～0.28，第二组分得分范围为-0.30～-0.02。

8.根据权利要求1～5任一项所述的检测分析方法，其特征在于：步骤(3)中，通过PCA分析，所述沙门氏菌的细胞质的第一组分得分范围为0.04～0.12，第二组分得分范围为-0.22～-0.10；所述单增李斯特菌的细胞质的第一组分得分范围为0.02～0.06，第二组分得分范围为-0.03～0.12。