[发明专利]甲基营养型芽孢杆菌及包含该微生物的菌剂制备方法与应用

说明书

本发明公开了一株保藏编号为CGMCC NO.15004的甲基营养型芽孢杆菌Z‑1(Bacillus methylotrophicus Z‑1)，以及含有此甲基营养型芽孢杆菌Z‑1的微生物菌剂，还提供了所述甲基营养型芽孢杆菌或微生物菌剂在防治草莓枯萎病中的应用。本发明提供的甲基营养型芽孢杆菌及其微生物菌剂对草莓枯萎病菌有显著拮抗作用，能够防治草莓枯萎病的发生，防治效率在80％以上。该菌株及其微生物菌剂的使用，可以降低草莓生产过程中化肥农药的施用，避免了过量使用化肥农药所带来的土壤板结、有机质下降、环境污染、生态失衡、药物残留、食品安全等问题，具有良好的生态和社会效益。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种对草莓枯萎病病原菌有拮抗作用的新型甲基营养型芽孢杆菌Z-1菌株及包含该菌株的微生物菌剂的制备方法与应用。

背景技术

甲基营养型芽孢杆菌Z-1(Bacillus methylotrophicus Z-1)在分类学中属细胞生物(Cellular organisms)、细菌域(Bacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、芽孢杆菌纲(Bacilli)、芽孢杆菌目(Bacillales)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)、芽孢杆菌属(Bacillus)，在土壤和其他自然环境中分布广泛，是土壤和植物微生态优势种群之一。近年来，随着对甲基营养型芽孢杆菌研究的不断深入，发现甲基营养型芽孢杆菌具有杀虫、抗菌、生物降解等多种生物学活性，被认为是芽孢杆菌属中最具有生物防治应用价值的菌种之一。

草莓(Fragaria ananassa Duch.)属于蔷薇科草莓属多年生草本植物，是具有较高经济价值的重要浆果之一，在全世界已知有50多种，集美食、保健及药用价值于一体，富含维生素C、四氢叶酸和酚类等多种生物活性物质，可有效预防心脑血管疾病，具有抗氧化、抗肿瘤、美容养颜等多种功效。近年来，随着草莓设施栽培面积的不断扩大，草莓枯萎病在一些主要种植区普遍发生，危害程度也逐年加重。当草莓连作种植时，植株发病率可高达89.2％。草莓枯萎病一旦发生，将会造成结实率降低，果实膨大异常、品质下降，产量大幅度降低等后果，严重影响草莓产业的经济效益与可持续发展。以往使用化学杀菌剂控制草莓枯萎病，但化学杀菌剂的大面积使用易带来环境污染、生态失衡、药物残留、食品安全等问题，所以利用低成本、高效率、环境友好和无药物残留的生物学方法防控草莓枯萎病倍受关注。甲基营养型芽孢杆菌是一种具有广谱抑菌活性的细菌，具有较强的次生代谢产物产生能力，能产生多种抑菌物质，利用甲基营养型芽孢杆菌制备微生物菌剂，将是未来生物防治草莓枯萎病最具有应用前景的一种技术手段。

发明内容

本发明的目的是提供一株能够高效拮抗草莓枯萎病菌的甲基营养型芽孢杆菌和微生物菌剂，该菌剂灌施于草莓根际，可以有效防治草莓枯萎病，从而减少草莓生产中化学农药的使用，减少其所带来的环境和食品安全问题，提升草莓的产量和品质。

为了达到上述目的，本发明提供了一种甲基营养型芽孢杆菌Z-1，该甲基营养型芽孢杆菌Z-1于2017年12月4日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)保藏，保藏编号CGMCC NO.15004。CGMCC地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明所述甲基营养型芽孢杆菌Z-1用于防治拮抗草莓枯萎病菌。

本发明所述甲基营养型芽孢杆菌Z-1对瓜类蔓枯病菌、白菜炭疽病菌、番茄叶霉病菌、西瓜枯萎病菌和辣椒疫霉病菌具有拮抗作用。

本发明还提供了一种包含上述甲基营养型芽孢杆菌的微生物菌剂的制备方法，具体步骤为：

S1、向种子液培养基中接种甲基营养型芽孢杆菌Z-1，30℃，培养24h，得到甲基营养型芽孢杆菌Z-1种子液，所述种子液中甲基营养型芽孢杆菌Z-1浓度为1.0～1.5×10^7～8CFU/mL；按体积比2～5.0％的比例将所述种子液接种到发酵培养基中，30℃，培养48h，得到甲基营养型芽孢杆菌Z-1发酵液；