[发明专利]基于热带爪蟾蝌蚪运动行为检测环境污染物发育毒性的方法

说明书

本发明公开了一种基于热带爪蟾蝌蚪运动行为检测环境污染物发育毒性的方法，该方法包括以下步骤：挑选发育阶段均一、健康的热带爪蟾胚胎；将环境污染物按照等比梯度配制成不同浓度的系列暴露液；将胚胎置于环境污染物暴露液中，25℃恒温培养箱中培养48‑72小时；连续采集15分钟内的蝌蚪运动视频，将运动轨迹可视化，测定包括运动距离、平均速度运动、最大运动速度的运动行为参数；采用方差分析对各暴露组与对照组的运动行为参数进行比较，根据检验结果判断污染物是否具有发育毒性及发育毒性程度；通过热带爪蟾蝌蚪的定量化运动行为参数简单、快速、灵敏地评价环境污染物的发育毒性，可作为污染水样生物毒性的补充检测指标，为水体中环境污染物的潜在生态风险提供参考依据。

技术领域

本发明涉及环境污染物的发育毒性评价技术领域，具体是一种基于热带爪蟾蝌蚪运动行为检测环境污染物发育毒性的方法。

技术背景

当今全球性两栖动物种群衰退现象非常严重，而环境污染物正是两栖动物种群衰退甚至灭绝的直接原因之一。两栖动物通常在水环境中完成繁殖和幼体发育过程，且两栖动物的卵极易吸收有机污染物，因此其幼体发育过程很有可能受到水中环境污染物的干扰。大量研究已发现重金属、农药等环境污染物能对两栖动物早期发育造成毒性效应，并持续作用于生长发育过程，导致两栖动物种群数量大量减少。这就要求必须重视环境污染物对两栖动物的发育毒性，开发简单有效的方法对环境污染物的发育毒性进行评估。

目前对环境污染物的两栖动物发育毒性研究主要采用非洲爪蟾胚胎致畸试验（The Frog Embryo Teratogenesis Assay Xenopus，FETAX），即将发育早期的非洲爪蟾胚胎在化学品溶液中暴露96h，通过检测胚胎死亡率、畸形率和致畸指数等来评价化学品的发育毒性。然而，导致胚胎死亡或畸形的化学品浓度通常比较高，与实际环境残留量不相符，而环境相关浓度下的污染物常常不会引起显著的爪蟾胚胎死亡或畸形。这使得非洲爪蟾胚胎致畸试验无法完全满足低浓度环境污染物所引起的发育毒性评价的需求。因此，为了评价实际环境污染物所引起的发育毒性和生态风险，开发一种能够快速、敏感地反映贴近环境真实浓度的污染物发育毒性的检测方法显得尤为必要。

发明内容

针对现有技术存在的上述缺点，本发明的目的是提供一种基于热带爪蟾蝌蚪运动行为检测环境污染物发育毒性的方法，可以简单、快速、灵敏地定量评估环境污染物的发育毒性。

本发明目的是通过以下技术方案实现的：

一种基于热带爪蟾蝌蚪运动行为检测环境污染物发育毒性的方法，该方法包括以下具体步骤：

步骤1：挑选发育阶段均一、健康的热带爪蟾胚胎；

步骤2：将环境污染物按照等比梯度配制成不同浓度的系列暴露液；

步骤3：将健康的热带爪蟾胚胎置于环境污染物系列暴露液中，在25℃恒温培养箱中连续培养48-72小时；

步骤4：连续采集15分钟内的蝌蚪运动视频，将蝌蚪运动轨迹可视化，测定包括运动距离、平均速度运动、最大运动速度的运动行为参数；

步骤5：采用方差分析对各暴露组与对照组的运动行为参数进行比较，根据检验结果的显著性水平判断是否具有发育毒性，根据相对运动距离和相对运动速度判断发育毒性程度。

所述步骤1具体包括：采用人工注射人绒毛膜促性腺激素的方法诱导热带爪蟾抱对产卵，在显微镜下挑选来自同一亲本、处于原肠胚早中期、发育正常的热带爪蟾胚胎，置于林格氏液中备用。