[发明专利]一种靶向PD1/PDL1相互作用的抗肿瘤活性多肽IMB-P6及其应用

说明书

本发明涉及一种靶向PD1/PDL1相互作用的抗肿瘤多肽及其应用。本发明所述的小分子多肽由13个氨基酸组成，其氨基酸序列为：Leu‑Thr‑Cys‑Ser‑Leu‑Ala‑Pro‑Asn‑Ile‑Ile‑Ser‑Gln‑Leu。本发明多肽利用固相化学合成法合成，产量高，工艺稳定，分子量为1372.64Da。本发明所提供的具有抑制PD1/PDL1相互作用的小分子多肽可用于制备肿瘤细胞选择性杀伤剂，高效应用于靶向杀伤肿瘤细胞。

技术领域：

本发明涉及一种具有PD-1/PD-L1抑制活性的多肽IMB-P6及其应用，属于抗肿瘤药物研发与应用技术领域。

背景技术：

肿瘤的治疗是当前科研人员面临的最大挑战。肿瘤治疗方法包括：手术、放疗、化疗以及免疫治疗。由于肿瘤本身易侵袭转移和复发，传统的“手术+放疗+化疗”的治疗方法虽可应用于绝大部分肿瘤，但其应答率低和应答持久性差都是不能真正治疗肿瘤的根本因素，且由于靶向性较差，放疗和化疗易损伤正常细胞，产生严重的不良反应。区别于前三种传统的治疗方法，肿瘤免疫治疗是通过调动机体免疫系统，增强抗肿瘤免疫力，从而抑制和杀伤肿瘤细胞，具有治疗多种类型肿瘤的潜力。肿瘤免疫治疗是当前肿瘤治疗领域中最具前景的研究方向之一，由于卓越的疗效和创新性，2013年其被Science杂志评为年度十大科技突破之首。免疫疗法主要包括细胞免疫疗法、肿瘤疫苗，以及免疫检查点抑制剂等研究热点，并已取得了很多具有应用前景的研究成果。

免疫检查点是指免疫系统中存在的一些抑制性信号通路。机体在正常情况下，免疫检查点可以通过调节自身免疫反应的强度来维持免疫耐受，然而，机体在受到肿瘤侵袭时，免疫检查点的激活可抑制自身免疫，有利于肿瘤细胞的生长和逃逸。目前，已批准上市两个免疫检查点——CTLA-4和PD-1——的靶向药物。程序性死亡受体-1(programmeddeath-1，PD-1)是一种诱导表达于活化的T细胞、B细胞和NK细胞等表面的共刺激分子，两个天然配体分别为PD-L1和PD-L2，表达于肿瘤细胞和抗原递呈细胞。激活PD-1/PD-L通路对已活化的T细胞有反向调控作用，降低T细胞活性，甚至诱导其凋亡。反之，阻断PD-1/PD-L通路可以增强T细胞活性以达到肿瘤免疫治疗的效果。因此，研究PD-1/PD-L1信号通路调节T细胞活性的机制对肿瘤发生和发展，自身免疫性疾病和慢性病毒感染均具有重要的生物学意义。

抗癌活性肽(anticancer bioactive peptide，ACBPs)，以下简称“ACBPs”；是用人胃癌细胞碎片免疫山羊，从其脾脏中分离获得的具有良好抗肿瘤活性的分子量单一的(16.7kD)肽类混合物(该方法已获得发明专利，NO：ZL96/22236)。该项目开始于1996年，研究历经20余年。科研人员经动物体内实验证实ACBPs是一种无毒副作用，可长期反复使用并有明显的抑制肿瘤细胞增殖作用，同时，体外实验表明有较强的杀伤癌细胞、抑制肿瘤细胞DNA合成的生物功能。

虽然ACBPs良好的抗癌活性及卓越的成药潜质毋庸置疑，但来源有限、成份复杂等问题限制其作为多肽候选药的研发，因此进行抗癌生物活性肽的活性组分分析及生物信息获取的研究十分必要。本专利发明人带领课题组成员多年来一直围绕ACBPs的单组分化开展研究工作，取得了一系列原创性有意义的研究成果：(1)应用2D-nano-LC-ESI LTQ-Orbitrap MS/MS技术，已解析抗癌生物活性肽各组分的组成及各单组分的基本生物合成信息，其中可以获得九个单组分的基本生物合成信息；(2)已确证其中一个单组分，命名为sx1-5并进行异源表达，其体外增免抑瘤作用得到确证；(3)通过BLAST分析发现，sx1-5与来自于人体的负责调控细胞中活性氧分子水平的抗氧化酶家族Peroxiredoxin 5(简写为PRDX5)相似率达89％，通过相似序列具有相似功能的预测，因此推断PRDX5也有类似抗肿瘤活性；(4)对PRDX5进行异源表达，并进行体内活性测定，发现其对结肠癌C26荷瘤小鼠有明显的抑制作用且呈剂量依赖性，对评价药物或药物前体物通过免疫系统杀伤肿瘤的经典——荷B16黑色素瘤小鼠的活性优异，抑瘤率达39.44％。