[发明专利]原奶或发酵乳中牛和马源性检测的引物和探针及试剂盒

说明书

本发明公开了一种原奶或发酵乳中牛和马源性检测的引物和探针及试剂盒，引物和探针序列如下：牛源性检测正向引物序列如SEQ ID No.1所示；马源性检测正向引物序列如SEQ ID No.2所示；两源性检测反向引物序列如SEQ ID No.3所示；牛探针序列如SEQ ID No.4所示；马探针序列如SEQ ID No.5所示；质控探针序列如SEQ ID No.6所示。本发明的引物、探针及试剂盒的特异性好、灵敏度高，可以实现原奶或发酵乳中牛源性、马源性以及质控同管检测，并且可以进行牛源性和马源性的定量检测。

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及原奶和发酵乳中动物源性检测领域。

背景技术

动物源性成分是指动物组织，包括肉类及其制品(含动物脏器)。动物源性检测是指从食品和饲料中检测其源性成分的方法。由于不同动物组织的价格差异，驱使一些不法商贩和企业在牛和羊等高价肉制品中掺杂猪和鸭等低价肉、在马奶和驼奶等高价奶中掺杂牛奶等低价奶。动物源性检测不仅有效保护消费者合法权利、民族利益、宗教信仰而且还能防止牛海绵状脑病、传染性海绵状脑病，疯牛病以及口蹄疫等人畜传染病的传播。锡林郭勒盟作为中国北方重要的牛、羊、马相关畜产品基地迫切需要研发具有自主知识产权的动物源性检测试剂盒。

马奶由于其营养成分组成和单胃消化系统被认为是最为接近人乳的食品。酸马奶是利用马奶自然发酵的乳制品。作为传统蒙医疗法的酸马奶具有治疗消化不良、降血压和降血脂的功效。由于马奶的价格相对牛奶较高，所以市场上出现用牛奶或牛奶制品(酸牛奶和酸汤)冒充马奶和酸马奶的现象。市场迫切需要能鉴别马乳制品中牛源性的技术。目前，动物源性成分检测技术主要集中在对样品蛋白质和DNA特异性检测和分析。涉及的技术手段包括酶联免疫(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)、电泳、色谱等。实时荧光定量PCR法(Real-time fluorescent polymerase chain reaction，RT-PCR)具有高通量和高效率等优点。Saez等建立了基于DNA的能够鉴别猪、牛、羊、鸡和火鸡的随机引物扩增指纹图谱技术。Walker等开发了针对卫星DNA特异性设计的能从未经加热处理的混合DNA样品中定量检出牛、猪和鸡源性成分的SYBR Green Ⅰ荧光定量检测方法。Zhang等通过线粒体基因设计引物和探针检测鲜肉、肉制品以及乳制品中牛源性成分，可以检出35pg级的牛源性DNA。

本研究计划通过以11种动物的线粒体基因组(牛、马、羊、猪、鸡、鸭、鹅、狗、兔、猫及鱼)为基础，通过比对、分析和筛选出牛和马特异的引物和探针组合进行以荧光定量PCR为基础的牛源性成分和马源性成分的定性和定量检测。研发出具有高度特异性和灵敏度适用于原奶和发酵乳中牛和马源性成分检验检测的引物和探针。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为：如何提供一种高效且特异性强的原奶或发酵乳中牛源性、马源性以及质控同管检测的引物、探针及试剂盒和方法，解决原奶或发酵乳中牛和马源性成分定性和定量检测问题。

本发明的技术方案为：原奶或发酵乳中牛源性和马源性以及质控同管检测的引物和探针，引物和探针序列如下：

牛源性检测正向引物序列如SEQ ID No.1所示；

马源性检测正向引物序列如SEQ ID No.2所示；

两源性检测反向引物序列如SEQ ID No.3所示；

牛探针序列如SEQ ID No.4所示；

马探针序列如SEQ ID No.5所示；

质控探针序列如SEQ ID No.6所示。

进一步地，牛探针、马探针和质控探针序列的5'端修饰有报告基团，3'端修饰有淬灭基团，报告基团为FAM、HEX、ROX或CY5中的任意一种，淬灭基团为TAMRA、BHQ1或BHQ2中任意一种。