[发明专利]一种多菌灵的比色检测方法

说明书

本发明提供了一种多菌灵的比色检测方法，包括下述的步骤：将待测样品与DNA在水溶液中进行第一次混合反应，所述DNA包含SEQ ID NO.1所示的序列；然后加入金纳米颗粒，使未与多菌灵结合的DNA吸附在金纳米颗粒上；之后加入无机盐进行第二次混合反应，通过溶液体系颜色变化定性判断有无多菌灵，通过采用紫外可见分光光度法定量检测多菌灵的浓度。本发明检测方法具有操作简单、快速、灵敏性高、选择性好等优点。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种多菌灵的比色检测方法。

背景技术

多菌灵，化学名为N-2-苯并吡唑基氨基甲酸甲酯。多菌灵是一种广谱内吸性杀菌剂，干扰病原菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细胞分裂，起到杀菌作用，对多种作物由真菌(如半知菌、多子囊菌)引起的病害具有防治效果，广泛用于果树、蔬菜、粮棉和林木病害的防治，但它的残留期比较长，对哺乳动物有一定的毒害作用，研究表明，多菌灵能引起肝病，还能导致染色体畸变等病症。因此，发展检测多菌灵残留分析方法具有重要的意义。

传统的用于多菌灵测定的方法主要有：(1)通过固相萃取法对样品进行提取，再利用高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法等色谱测定的方法。色谱法检测准确，但成本高，前处理过程复杂，检测时间长，需要具备一定技术水平的专业人员才能进行操作，适合在实验室进行，限制了该方法在大规模的农药残留检测和现场检测中的应用。(2)使用电化学法检测多菌灵。通过不同的电极材料例如碳纳米管或石墨烯修饰的玻碳电极、掺磷螺旋碳纳米纤维、掺硼金刚石电极、环糊精/石墨烯复合片等实现对多菌灵的电化学检测。该方法相较于色谱法显示出省时，低成本，易使用且灵敏度高的优点。(3)根据多菌灵分子结构和特异基团设计并合成多菌灵的半抗原，合成人工抗原从而制备出理想效价的抗体，发展的一种多菌灵残留酶联免疫吸附测定(ELISA:Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法。并研制了ELISA试剂盒定量定性分析多菌灵，能对果、蔬、茶中农药残留实现快速、现场检测。

传统的检测多菌灵的色谱法需要大型的仪器，并且其程序繁琐，费时费力，传统的前处理过程过于繁琐，回收率不稳定。大量使用有机溶剂对环境造成污染，在复杂的回收过程中易造成多菌灵损失且灵敏度低。而电化学法选择性低且重复性不高，在复杂样品中易受到同其他农药干扰从而影响检测结果，难以实现实际样品中的特异性检测。酶联免疫吸附测定法操作步骤复杂，影响反应因素较多，且试剂盒成本高，无法实现多菌灵的低成本快速检测。因此，发展一种快速的，低成本的，简单易行的特异性好灵敏度高的多菌灵检测方法具有非常重要的意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种多菌灵的比色检测方法，不仅可快速定性检测多菌灵，还可以定量检测，操作简单快速、灵敏性高、选择性好。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种多菌灵的比色检测方法，包括下述的步骤：

将待测样品与DNA在水溶液中进行第一次混合反应，所述DNA均包含SEQ ID NO.1所示的序列；

然后加入金纳米颗粒，使未与多菌灵结合的DNA吸附在金纳米颗粒上；

之后加入无机盐进行第二次混合反应，通过溶液体系颜色变化定性判断有无多菌灵，通过采用紫外可见分光光度法定量检测多菌灵的浓度。

优选的，所述第一次混合反应和第二次混合反应均在在室温条件下进行。

优选的，所述第一次混合反应的时间为10min～20min，所述第二次混合反应的时间为10min～20min。

优选的，所述第一次混合反应之前，先对DNA链退火处理，使DNA解链，然后再与待测样品反应。

优选的，所述金纳米颗粒的粒径为11nm～15nm。

优选的，所述无机盐为氯化钠。