[发明专利]快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物、方法及试剂盒

说明书

一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物及方法，该引物序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，该鉴定方法是以待鉴定的中华鳖DNA为模板，利用前述引物进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，当扩增产物出现973bp大小的条带时，中华鳖个体的遗传性别判定为雌性(即性染色体型为ZZ)；当扩增产物出现1533bp大小的条带和973bp大小的条带，则中华鳖个体的遗传性别判定为雄性(即性染色体型为ZW)。本发明同时提供含有前述引物的试剂盒。本发明简便快速、成本低，为中华鳖遗传性别标记开发、遗传性别鉴定、性别决定机制研究和人工控制中华鳖性别分化研究提供参考依据。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及中华鳖遗传性别(性染色体型ZZ/ZW)鉴定领域，特别涉及一种能够快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物、鉴定方法及试剂盒。

背景技术

中华鳖(Trionyx sinensis)是我国名贵水产品，其肉味鲜美、营养丰富、滋补力强，是我国重要的淡水养殖动物，产量位居世界首位。我国中华鳖商业养殖始于20世纪70年代后期，80年代是积累阶段，90年代进入稳定的发展期，目前中华鳖养殖业已形成了大规模、有影响的特种水产养殖产业，其野生鳖市价仍达300元/Kg以上，养殖鳖市价也在80～120元/Kg。在中华鳖养殖过程中，雄鳖比雌鳖生长快25％～30％，且雄鳖裙边宽厚、脂肪少，具有更高的营养价值，但雄鳖单价比雌鳖单价高20％。因此，若能养殖全雄鳖，可缩短养殖周期，显著提高养殖产量和效益。

中华鳖性染色体型为ZZ(遗传性别为雄性)/ZW(遗传性别为雌性)。由于中华鳖生理性别除受遗传性别(性染色体型)控制外，还受环境因素影响，因此在生产中我们常采用控制环境因素来调控中华鳖雄性比例，提高中华鳖养殖效益。因此中华鳖遗传性别鉴定在中华鳖雄性化育种中是一种十分重要的技术手段。目前，国内外研究人员围绕中华鳖性别分化和控制开展了相关探索，现行研究中对中华鳖遗传性别的鉴定主要利用性染色体Z/W形态差异采用组织切片观察鉴定(王伟；钱国英；李彩燕等.2014)和对性染色体Z/W基因组差异基因采用荧光原位杂交(Badenhorst,D；Stanyon,R；Engstrom,T et.al.2013)鉴定。这两种技术操作复杂、技术水平要求高、鉴定工作时间长、鉴定成本高。

发明内容

本发明的目的是，针对上述现有技术的不足，提供一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物及方法，同时还提供快速鉴定中华鳖遗传性别的试剂盒。

本发明利用中华鳖性染色体Z和性染色体W上的基因DNA差异片段长度不同的特点，在差异片段两端设计PCR扩增引物，对个体组织DNA样体进行PCR扩增，依据琼脂糖电泳PCR产物的条带差异进行中华鳖遗传性别(ZZ/ZW)鉴定。

具体地，本发明所采用的技术方案是：一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR扩增引物，该引物序列如下:

正向引物：5’-AGGGCTTGGCTATGAGGGAA-3’，见SEQ ID No.1，

反向引物：5’-TAAATTAGGACTGGAAGACACC-3’，见SEQ ID No.2。

本发明同时提供一种快速鉴定中华鳖遗传性别的PCR方法，该方法是以待鉴定的中华鳖DNA为模板，利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增，扩增产物进行电泳检测，当扩增产物出现973bp(见SEQ ID No.3)大小的条带时，中华鳖个体的遗传性别判定为雌性(即性染色体型为ZZ)；当扩增产物出现973bp(基因片段序列SEQ ID No.3大小的条带和1533bp(见SEQ ID No.4)大小的条带，则中华鳖个体的遗传性别判定为雄性(即性染色体型为ZW)。