[发明专利]人Wnt5a-NL核酸重组体及其制备方法与应用

说明书

本发明提供一种新型的人Wnt5a‑NL核酸重组体及其制备方法与应用。本发明的人Wnt5a‑NL核酸重组体是将如SEQ ID NO:1所示的人Wnt5a蛋白截短体编码基因构建到真核表达载体上得到的重组质粒。实验表明，人Wnt5a‑NL核酸重组体注射小鼠能够抑制炎症和骨破坏，可开发用于治疗类风湿关节炎等疾病。本发明提供的核酸重组体属于治疗性质粒，可为类风湿关节炎等疾病提供一种新的治疗途径和思路。该核酸重组体治疗效果良好，且制备简单、成本低廉、稳定性好、贮存方便，适于规模化生产。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地说，涉及一种人Wnt5a-NL核酸重组体及其制备方法与应用。

背景技术

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种能够导致全身性骨丢失和骨折风险增加的慢性炎症性疾病。其骨影像学可表现为关节周围骨质疏松和边际糜烂。病理学检测结果可出现侵蚀性滑膜炎、关节软骨和骨组织侵蚀性破坏。疾病早期关节周围的骨流失和后来发展的边际糜烂会造成关节周围骨质疏松，进而出现全身性骨密度降低。骨流失作为RA的并发症，在局部和全身都会发生，这会增加骨折风险。近年有报道提示，无翅(wingless,WNT)信号通路的激活可以通过刺激炎症滑膜关节中骨免疫细胞的活化而加速骨吸收。

Wnt5a是一种分泌型糖蛋白，据报道，Wnt5a基因编码外显子1a和1b两种异构体，这种转录基于如核因子κB(nuclear factor-k B,NF-κB)、转化生长因子β(transforminggrowth factor-β,TGF-β)、Notch和Hedgehog信号等多种机制的参与。与其他Wnts蛋白类似，Wnt5a蛋白需要两个重要的翻译后修饰才能获得完全的功能。Wnt5a蛋白的棕榈酰化和糖基化是其与特定受体结合和介导分泌的必要步骤。分泌型Wnt5a蛋白总是被脂质修饰而具有疏水性。由于这种独特的翻译后修饰，增加了研究内源性Wnt5a蛋白溶解性和生化特征的障碍。

Wnt5a作为非经典Wnt蛋白家族的一个成员，主要激活非经典Wnt信号转导途径，包括Wnt-Ca²⁺和Wnt-PCP通路。例如，Wnt5a可以与Ror2结合，诱导细胞内JNK信号的转导和活化，同时抑制经典β-catenin通路。另外，也有报道显示Wnt5a可以结合FZ-4受体激活β-catenin通路。Wnt5a的这种双信号活性可能是由于其不同的结构域能结合和激活特定的受体。获得Wnt5a活性蛋白和解析晶体结构的困难，以及可结合受体的多样性，都对全面了解其功能造成了极大的困难。