[发明专利]一株不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌及其制备舍雷肽酶的应用

权利要求书

1.不产灵菌红素的粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)MW-9菌株，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:60315，保藏日期2018年1月18日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510075。

2.一种权利要求1所述粘质沙雷氏菌MW-9菌株在发酵产舍雷肽酶中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用是将粘质沙雷氏菌MW-9菌株接种入产酶培养基，于28～32℃、200～250r/min发酵24～36h，发酵液经过离心后去除菌体获得粗酶液，粗酶液分离纯化即可得到舍雷肽酶；所述产酶培养基终浓度组成为：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麦芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO₄ 1g/L，NaCl 5g/L，溶剂为水，初始pH为7.5～8.0。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述粘质沙雷氏菌MW-9菌株在产酶培养前，先经斜面活化培养，然后经种子培养，获得的种子液再以体积浓度2％～5％的接种量接入产酶培养基进行培养，具体步骤如下：

(1)将粘质沙雷氏菌MW-9菌株接种于斜面培养基，于30℃培养24～36h，得到活化后的斜面菌体；所述的斜面培养基终浓度组成为：蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，初始pH为7.0；

(2)将步骤(1)活化后的斜面菌体接种至种子培养基中，于30℃、200～250r/min振荡条件下培养18～24h，得到种子液；所述种子培养基终浓度组成为：酵母浸出粉5～11g/L，牛肉膏3.0～6.6g/L，麦芽浸粉10.0～12.2g/L，MgSO₄ 1g/L，NaCl 5g/L，溶剂为水，初始pH为7.5～8.0。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述粗酶液分离纯化的方法为：

(1)往粗酶液中加入硫酸铵，使其饱和度达到40～45％，4℃沉淀10～12h，之后于4℃、8000×g条件下离心10～15min，去除沉淀，保留上清液；

(2)往步骤(1)上清液中再次加入硫酸铵，使其饱和度达到70～75％，4℃沉淀10～12h，之后于4℃、8000×g条件下离心10～15min，弃去上清液，沉淀物用pH值8.0的Tris-HCl缓冲液溶解，得到舍雷肽酶粗品的浓缩液；

(3)将步骤(2)所得浓缩液装入截留分子量为10～20kDa的透析袋中，以去离子水为透析液透析除盐后，于温度-40～-60℃、真空度10～20Pa冷冻干燥，即得到舍雷肽酶冻干酶粉。