[发明专利]一种用于检测黄连叶斑病致病菌的引物及其方法和应用在审
| 申请号： | 201810074737.6 | 申请日： | 2018-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN107988328A | 公开（公告）日： | 2018-05-04 |
| 发明（设计）人： | 游景茂;郭杰;熊坤;郭晓亮;朱志贤;段媛媛;邹宗成 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院中药材研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6848 | 分类号： | C12Q1/6848;C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司11246 | 代理人： | 夏艳 |
| 地址： | 445000 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 黄连 叶斑病 致病菌 引物 及其 方法 应用 | ||
1.一种用于检测黄连叶斑病致病菌的引物，其特征在于，所述的引物如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
2.一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)提取待测样品基因组DNA；
2)利用通用引物ITS1/ITS4进行第一轮PCR扩增；
3)将第一轮扩增产物稀释10倍，作为模板，利用特异引物进行第二轮PCR扩增；
4)凝胶电泳检测，于凝胶成像系统下拍照检测，存在289bp的DNA特异性条带，则确定所检测样品中存在黄连叶斑病致病菌。
3.根据权利要求2所述的一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，所述的样品基因组利用CTAB法提取。
4.根据权利要求2所述的一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，所述的通用引物如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示。
5.根据权利要求2所述的一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，所述的特异性引物如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
6.根据权利要求2所述的一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，所述的第一轮PCR扩增的反应体系为25μL：2×Taq Master Mix 12.5μL，10μM的上下游引物ITS1/ITS4各1μL，DNA 1μL，双蒸水9.5μL；反应程序为：预变性94℃ 5分钟，94℃ 30秒，54℃ 1分钟，72℃ 1分钟，30个循环，最后在72℃延伸3分钟，16℃保存。
7.根据权利要求2所述的一种黄连叶斑病致病菌的快速检测方法，其特征在于，所述的第二轮PCR扩增的反应体系为25μL：2×Taq Master Mix 12.5μL，10μM的上下游引物HLTY1F/HLTY1R各1μL，DNA模板1μL，双蒸水9.5μL；反应程序为：预变性94℃ 3分钟，接着94℃ 30秒，52℃ 30秒，72℃ 30分钟，30个循环，最后在72℃延伸3分钟，16℃保存。
8.权利要求1所述的用于检测黄连叶斑病致病菌的引物在检测黄连叶斑病致病菌中的应用。
9.一种用于检测检测黄连叶斑病致病菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含权利要求1所述的引物。
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