[发明专利]一种检测血液中西酞普兰含量的液相色谱分析方法

说明书

本发明检测血液中西酞普兰药物浓度的方法是使用液相色谱分析仪器和荧光检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪器和荧光检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待测血液样品中目标物相对浓度x，内标物工作液浓度是已知的，由此计算得到该样本中待检测血液中的西酞普兰药物浓度，本发明将内标法与高效液相色谱法相结合，提高了定量结果的准确性，消除系统误差；缩短了分析时间，使检测过程简便快速，更利于在临床治疗中对患者体内的西酞普兰血药浓度进行监测。

技术领域

本发明涉及精神类药物的临床血药浓度监测技术领域，尤其涉及一种检测血液中抗抑郁药物西酞普兰浓度的方法。

背景技术

西酞普兰(citalopram)，分子式为C₂₀H₂₁FN₂O，具体化学结构如下图1所示，其属于选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，由于对受体选择性高，较少产生严重的心血管毒性，不易产生药物相互作用，患者依从性较好，已成为抗抑郁的一线药物，此外，临床上亦用于镇痛、戒酒及老年性痴呆和多发梗塞性痴呆的治疗。受基因多态性影响，个体体内药物浓度差异较大，血药浓度与临床疗效和不良反应密切相关，在精准医学时代，需要监测患者血药浓度并根据血药浓度来调整药物剂量，以实现个体化用药。因此，测定血液中西酞普兰浓度对保证其药物疗效具有重要作用。

常用的西酞普兰血药浓度的测定方法主要包括毛细管电泳-电化学发光法、高效液相色谱-荧光检测法、高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱质谱联用法等。其中，高效液相色谱质谱联用法成本较高，对人员及场地要求高，不适于在中小型医院等广泛开展，故目前国内外检测人体血浆中西酞普兰浓度的方法主要是高效液相色谱法，但西酞普兰在人体中的血药浓度较低，且目前方法前处理操作较复杂，外标法定量易导致结果不够准确，此外，还存在分析时间较长，消耗有机溶剂较多等问题。

发明内容

针对上述技术问题，本发明目的是提供一种检测血液中西酞普兰药物浓度的方法，将内标法与高效液相色谱法相结合，使西酞普兰血药浓度的测定快速准确，并很大程度上缩短样品分析时间，且在分析中溶剂流速较低，减少了有机溶剂的使用，利于环保。

本发明采用以下技术方案：

本发明的一种检测血液中西酞普兰药物浓度的方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

首先将至少三种不同浓度的标准工作液20μL分别和10μL内标工作液及由1∶1的甲醇和水组成的170μL复溶液混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀30s-2min后，使用液相色谱分析仪器和荧光检测器对上述标准溶液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的西酞普兰和内标色谱图，在上述西酞普兰和内标色谱图中分别得到标准目标物峰面积与内标物峰面积，以上述至少三个标准目标物峰面积与内标物峰面积的比值作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液浓度与内标工作液浓度的比值即相对浓度为作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为西酞普兰溶液，所述内标工作液为环庚米特溶液；

(a)标准工作液的配制：

精确称取西酞普兰标准品3.63mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，即浓度为284μg/mL的西酞普兰溶液，将标准储备液A用含水量为25％-60％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有0.1-1.5μg/mL西酞普兰的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；

(b)内标工作液的配制：