[发明专利]一种筛选分化hPSCs向MSCs的方法

说明书

本发明公开了一种筛选分化hPSCs向MSCs的方法，其步骤是：1)将未分化hPSCs细胞株转移到细胞外基质包被的培养板上培养；2)将细胞消化并转移到由明胶类细胞外基质包被的培养板中，进行细胞筛选培养；3)将细胞消化并转移到贴壁用培养板上继续培养，获得MSCs。该技术方案操作简便，易于实现，并且极大缩短了MSCs细胞的培养时间，有利于MSCs细胞的大规模培养。

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，特别涉及一种筛选分化hPSCs向MSCs的方法。

背景技术

目前“干细胞与再生医学(疗)”已成为当今21世纪重大的核心研究项目！作为临床再生医学移植的细胞来源主要包括人多能干细胞(human pluripotent stem cells，hPSCs)即人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)和人诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)等的统称以及成体干细胞这两大类，其中成体干细胞包括造血干细胞，间充质干细胞等。来源于中胚层的间充质干细胞最初是由1966年Friedenstein等从老鼠骨髓抽出物中发现成纤维细胞样的细胞存在而且分离鉴定出来的，1991年Caplan最初将这些细胞称为间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)。2006年国际细胞治疗协会(International Society for Cellular Therapy,ISCT)提议把这些细胞正式命名为‘multipotent mesenchymal stromal cells’或‘mesenchymalstem cells’(MSCs)；并且把MSCs定义为1)可以贴壁生长；2)能向成骨、软骨和脂肪细胞等中胚层谱系分化；3)高水平表达CD105、CD90、CD73等MSCs阳性标志；基本不表达CD45、CD34、CD14或CD11b、CD79α或CD19以及HLA-DR等MSCs阴性标志。MSCs除了自我更新、具有分化成中胚层谱系的肌肉、骨骼、软骨、脂肪、肌腱和韧带，甚至还可以跨胚层转分化为神经、胰岛细胞等多谱系分化和免疫调节的能力，且避免发生肿瘤。MSCs移植手术自20世纪60年代以来一直被用于治疗白血病和其他疾病，但由于其风险，只有具有生命危险的患者才会接受移植手术，随着移植技术的进步使其更加可行的用于没有生命垂危的疾病，例如2010年JamesAnkrum等报道了一些再生医疗机构已经将人间充质干细胞(hMSCs)应用于心肌梗塞、中风、移植物抗宿主病(GvHD)、红斑狼疮、关节炎、克罗恩病、急性肺损伤、慢性阻塞性肺病、肝硬化、多发性硬化症、肌萎缩的横向硬化(ALS)和糖尿病等各种疾病患者并且取得了一定的疗效。根据美国一家最大的临床试验注册中心ClinicalTrials.gov2016年临床试验数据库(拥有201个国家的约25万种试验记录)显示～500个临床试验是与MSCs有关，其中有许多临床试验评估了MSC对多种疾病的影响，包括骨关节炎，创面愈合，退行性疾病，自身免疫性疾病等。可见目前的细胞基础治疗重点是使用MSCs。