[发明专利]一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用

说明书

本发明公开了一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用。本发明采用高效液相色谱法对核苷及碱基类物质进行分离，所述的高效液相色谱法中的色谱柱为三键键合的酰胺基键合相的氨基色谱柱；所述的高效液相色谱法中的流动相为含盐水溶液和极性有机溶剂；所述的核苷及碱基类物质为腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤。该分离方法操作简单，可以将六种核苷及碱基类物质完全分离，峰形好，且不受其他有机杂质干扰，灵敏度高、简单快速。

技术领域

本发明涉及一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用。

背景技术

近20年来，随着生物技术的进步，核酸系列产品，包括核苷酸、核苷及其衍生物得到广泛使用。其中核苷类化合物在抗病毒、抗肿瘤方面，展示了不可取代的独特作用。美国FDA批准的抗艾滋病药物中大都是核苷类衍生物。核苷类药物有望成为继磺胺药和抗生素之后的新一代具有重要作用的药物。

对于一类新的药物，对其代谢产物的研究与监控显得尤其重要，尤其核苷类药物的代谢产物为内源性物质。腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和尿嘧啶是核糖核酸(RNA)代谢的最终产物。腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶是脱氧核糖核酸(DNA)代谢的最终产物，次黄嘌呤是RNA代谢的中间产物。

目前，测定核苷及碱基类物质主要采用高效液相色谱法，但是存在以下问题：由于该类成分极性大，一般色谱柱很难达到较好的保留，出峰时间过早，受杂质峰干扰较大，分离效果差，尤其是对于成分复杂的中药和成方制剂，为了达到分离效果，常采用高水相的流动相，或者是含有离子对试剂为流动相，长期使用容易造成色谱柱柱效下降、寿命缩短。

因而，在不损耗色谱柱的情况下，如何快速有效地对核苷及碱基类物质进行分离，是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是现有的分离纯化核苷及碱基类物质的方法复杂，存在复杂样品难以达到有效分离、色谱条件苛刻、长期使用对色谱柱损伤大、峰形差、灵敏度低、重复性差等问题，从而提供了一种核苷及碱基类物质的分离方法及其应用。该分离方法操作简单，可以将多种核苷及碱基类物质完全分离，峰形好，且不受其他有机杂质干扰，灵敏度高、简单快速。

本发明提供了一种核苷及碱基类物质的分离方法，其包含以下步骤：采用高效液相色谱法对核苷及碱基类物质进行分离，即可；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为三键键合的酰胺基键合相的氨基色谱柱，例如XBridge Amide柱；

所述的高效液相色谱法中的流动相为含盐水溶液和极性有机溶剂；

所述的核苷及碱基类物质为腺苷、胞苷、鸟苷、腺嘌呤、次黄嘌呤和鸟嘌呤。

本发明中，所述含盐水溶液中盐的种类可为本领域中流动相常规所用的种类，例如甲酸铵和/或乙酸铵。

本发明中，所述含盐水溶液中还可含有甲酸。所述甲酸的浓度可为本领域常规的浓度，例如0.1％，所述百分比是指体积百分比。

本发明中，所述含盐水溶液中盐的浓度可为本领域常规的浓度，例如10mmol/L。

本发明中，所述含盐水溶液可为含有5mmol/L的甲酸铵、5mmol/L的乙酸铵和0.1％的甲酸的水溶液，所述百分比是指体积百分比。

本发明中，所述极性有机溶剂中还可含有0.1％甲酸，所述百分比是指体积百分比。

本发明中，所述极性有机溶剂可根据三键键合的酰胺基键合相的氨基色谱柱的性能进行常规选择，例如乙腈。

本发明中，所述的高效液相色谱法可采用梯度洗脱，所述梯度洗脱时所述含盐水溶液和所述极性有机溶剂的体积比可为8:92～50:50。

本发明中，所述梯度洗脱中，所述流动相比例随时间的变化范围可如表1所示：