[发明专利]一种将成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用。所述方法包括以下步骤：将成纤维细胞培养在培养基中，在培养基中加入Myosin抑制剂，继续培养，直至得到永生化细胞。本发明还涉及诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的培养基。本发明的方法只需单个小分子或单因素处理，操作简单，重复性好，并且在体内体外均可高效进行，不涉及转基因操作，获得的永生化细胞安全性好，适用于了解细胞生长规律、探索细胞衰老原因、解决器官移植问题，还能够为治疗肿瘤、控制肿瘤细胞的增殖奠定一定的基础，具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种将成纤维细胞转化为永生化细胞的方法及其应用。

背景技术

正常组织来源的体细胞在通常的体外培养条件下可生长和分裂，但经过有限次的细胞传代后，就会停止增殖，发生衰老和死亡，这就限制了细胞培养技术的应用。细胞永生化(cell immortalization)是指细胞在体外培养过程中，由于自身基因变化或者各种外界刺激因素，从增殖衰老的危机中逃离，避免了正常细胞的衰老死亡过程，可以长期传代培养、无限分裂增殖。

对于细胞永生化的机制和方法已经进行了大量的研究，已经证实，放射性因素、端粒酶激活、病毒基因转染、原癌基因与抑癌基因等均可以导致细胞的无限增殖分裂。但经过多年的研究发现，虽然永生化的机制有相似之处，但同样的永生化方法并非适用于所有细胞。例如，肝细胞永生化的方法有抑癌基因敲除、质粒转导和病毒转染、可恢复性永生化等，上皮细胞永生化的方法有DNA致瘤病毒转染等，心肌细胞永生化的方法有P16慢病毒载体和可逆SV40病毒转导途径成功的案例。

成纤维细胞(fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞(mesenchymal cell)分化而来。

目前，现有技术已经披露了一些诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法。王新文等(“皮肤成纤维细胞永生化的研究进展”，中国生物工程杂质，第22卷第4期，2002年8月)披露了皮肤成纤维细胞永生化的方法，除了以上常用的方法外，总的概括起来还有以下几种方法：HPV、四硝基喹啉一氧化物、黄曲霉素等。

针对性发展对特定细胞的永生化技术可以实现具有传代次数少、增殖分裂慢的正常体细胞的长期传代、无限分裂增殖，增加细胞周期寿命。这不仅有助于了解细胞生长规律、探索细胞衰老原因，还对解决器官移植问题有着重要的临床意义。

另外，资料显示，细胞永生化是转化为肿瘤细胞的前提，是由正常细胞转化为肿瘤细胞所必经的阶段，研究细胞的永生化可以为治疗肿瘤、控制肿瘤细胞的增殖奠定坚实的基础。

因此，针对成纤维细胞转化为永生化细胞的研究有着广阔的应用前景。

发明内容

本发明人经过不断的探索，意外地发现可以通过Myosin抑制剂(-)-Blebbistatin实现上述目的。

因此，本发明涉及Myosin抑制剂在诱导细胞永生化中的应用。

优选地，所述永生化为诱导成纤维细胞转化为永生化细胞。

优选地，所述Myosin抑制剂为(-)-Blebbistatin。

本发明还涉及一种诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：将成纤维细胞培养在培养基中，在培养基中加入Myosin抑制剂，继续培养，直至得到永生化细胞。

优选地，所述培养基包括基础培养液、胎牛血清和永生化诱导培养液中的任一种或几种。

本发明还涉及一种诱导成纤维细胞转化为永生化细胞的培养基，其特征在于，其包括Myosin抑制剂、基础培养液、胎牛血清和永生化诱导培养液。