[发明专利]检测人SLC11A1基因第543位密码子非保守碱基多态性的引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明检测人SLC11A1基因第543位密码子非保守碱基多态性的引物组、试剂盒及应用，属于分子诊断和基因诊断领域。引物组选自引物组P1、引物组P2、引物组P3或引物组P4中的一种。引物组在检测SLC11A1第543位密码子非保守碱基G/A多态性中的应用。引物组在制备检测SLC11A1第543位密码子非保守碱基G/A多态性的试剂盒中的应用。试剂盒选自试剂盒P1、P2、P3或P4中的一种。本发明具有以下优点：本发明同时使用四条引物从而提高了检测的特异性；在使用时只需一恒定温度就能扩增反应，不需要特殊试剂与设备；具有高特异性；能快速、高效扩增；灵敏度高；鉴定过程简便，通过肉眼观察鉴定，无需电泳等其他任何分析步骤。

技术领域

本发明属于分子诊断和基因诊断领域，为体外诊断试剂，试剂检测对象为人外周血DNA；具体涉及检测人SLC11A1基因第543位密码子非保守碱基多态性的引物组、试剂盒及应用。

背景技术

结核病是全世界关切的公共健康问题，全球大约有三分之一人口被结核分枝杆菌感染，每年有三百余万人死于结核病。而结核分枝杆菌暴露是发展为结核病的关键环节，宿主因素同样影响着结核分枝杆菌的易感性。流行病学统计结果显示：某些人群存在对结核病较高的易感性。来自动物模型的实验证明：一些与免疫功能相关的基因及其调控基因与小鼠结核分枝杆菌的感染和致病性相关。例如在小鼠对卡介苗(BCG)、胞内分支杆菌(M.intracellulare)、鸟型分支杆菌(M.avium)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)杜氏利什曼虫(Leishmania donovani)的感染受到lsb的单基因控制，该基因位于小鼠1号染色体上。该基因为隐形的小鼠具有对上述细菌感染的抵抗能力，研究发现Lsb基因产物能够激活巨噬细胞的。

人类SLC11A1基因位于2q35，包含15个外显子，编码550个氨基酸，它编码的溶质转运体家族11成员1蛋白，也曾命名为天然抗性相关巨噬细胞蛋白1(NRAMP1)，分布于巨噬细胞的吞噬溶酶体膜上。它通过影响巨噬细胞的活化来调节IL-1β、主要组织相容性复合物(MHC)II类分子、TNF-α、NO释放和抗菌性等功能，现已发现SLC11A1的5’端int4和D543N以及3’UTR多态性与结核病相关，其中INT4和3’UTR的杂合子在结核病患者中表达量显著提高。根据一项最新研究成果，发现第543位密码子的非保守碱基G/A替换(简称为D543N)已被证实与中国肺结核患者易感性具有相关性。因此可以利用这一发现，对SLC11A1基因D543N进行分子分型，从而对结核病易感性进行判断，并将结核病易感人群筛选出来，通过采取针对性的有效预防和提前干预措施，从而避免结核分枝杆菌感染、降低结核病发病率的目的。

目前，多态性位点进行分析的方法主要包括荧光定量PCR、限制性片段长度多态性PCR、扩增组织突变系统PCR、变性高效液相色谱分析等方法。以上方法操作繁琐，依赖复杂的仪器设备，对操作人员要求高，因此不适用于大规模筛查和基层单位开展。虽然测序技术在基因组分型检测方面仍是金标准，但成本较高，且耗时较长。基于PCR的技术需要有变性、退火、延伸三个步骤，每个步骤的反应温度和时间均不相同且有十分精确的要求，甚至需要进行20～40个循环来完成，因此需要依赖相对贵重的PCR温度循环仪进行控制，不利于现场诊断的要求。

发明内容

本发明公开了一种人类SLC11A1基因D543N位点多态性快速检测试剂盒，改善了目前测序技术不易普及推广、PCR反应需要依赖精密仪器的不足。具有特异性强、灵敏度高、操作简便、不需要依赖昂贵的仪器设备、能够在1小时内对人体血液样本进行检测，并且通过肉眼直接观察结果等优点。利用本发明专利，能够特异性检出SLC11A1基因D543N位点多态性，通过该位点多态性信息，筛选出结核易感人群，通过采取针对性的预防措施，达到降低结核病发病率的目的。

本发明的目的在于公开了检测人SLC11A1基因第543位密码子非保守碱基多态性的引物组。

本发明第二个目的在于公开了检测人SLC11A1基因第543位密码子非保守碱基多态性的试剂盒。