[发明专利]一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的引物组、试剂盒及应用

说明书

本发明一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的引物组、试剂盒及应用，属于分子诊断和基因诊断领域。所述引物组为KATGF3、KATGB3、KATGFIP和KATGBIP。引物组在检测katG基因315位点突变中的应用。引物组在检测结核分枝杆菌对异烟肼耐药性中的应用。引物组在制备检测katG基因315位点突变试剂盒中的应用。本发明具有以下优点：本发明同时使用四条引物从而提高了检测的特异性；在使用时只需一恒定温度就能扩增反应，不需要特殊试剂与设备；具有高特异性；能快速、高效扩增；灵敏度高；鉴定过程简便，通过肉眼观察鉴定，无需电泳等其他任何分析步骤。

技术领域

本发明属于分子诊断和基因诊断领域，为体外诊断试剂，试剂检测对象为结核分枝杆菌DNA；具体涉及一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的引物组、试剂盒及应用。

背景技术

结核病是全世界关切的公共健康问题，全球大约有三分之一人口被结核分枝杆菌感染，每年有三百余万人死于结核病。结核分枝杆菌耐药为结核病的治疗造成了极大挑战。异烟肼是结核病治疗的一线药物，结核分枝杆菌异烟肼耐药是造成结核病治疗失败的重要原因，因此对结核分枝杆菌耐药谱进行检测，不仅有利于选择有针对性的治疗方案，而且对于结核分枝杆菌耐药现状的流行病学调查也具有重要意义。

研究表明katG基因突变是异烟肼耐药的主要机制，而且突变位点不同决定了不同程度的异烟肼耐药。katG基因编码结核分枝杆菌过氧化氢-过氧化物酶，若katG基因突变，有可能导致异烟肼活化效率降低或不能活化，从而引起结核分枝杆菌对异烟肼产生耐药性。其中katG基因315位点突变占结核分枝杆菌异烟肼耐药的50～95％；此外也有报道该基因463位点突变也与异烟肼耐药相关，但尚存争议；此外320和232位点的突变也有报道，但比例很低。因此katG基因315位点突变在突变导致的结核分枝杆菌异烟肼耐药中占有重要地位。

结核分枝杆菌培养周期较长(7-14d)，而且阳性率偏低，药敏试验虽然是判定细菌对不同药物敏感性的重要实验方法，但是具有一定局限性，除了检测周期长导致延误治疗时间之外，还存在检测人员的暴露风险。此外，PCR技术虽然具有快速、灵敏和特异的优点，但是需要复杂的仪器设备和专业人员操作；此外基因芯片虽然能够检测靶基因突变，具有灵敏度高、特异性强的特点，但是操作繁琐，需要经过PCR、杂交、读片等过程，无法满足实时检测的要求，也不利于在基层医院开展。此外虽然测序技术在基因突变检测方面仍是金标准，但成本较高，且耗时较长。

发明内容

本发明的目的在于公开了一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的引物组。

本发明第二个目的在于公开了一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的试剂盒。

本发明第三个目的在于公开了上述引物组和试剂盒的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种用于结核分枝杆菌katG基因突变快速检测的引物组，其中，所述引物组为：

KATGF3:GGACGCGATCACCAGC

KATGB3:ATCGGATCCACCCGCA

KATGFIP:AGCTCCCACTCGTAGCCGTACAACGAACACCCCGACGAAAT

KATGBIP:CACCATCCCGGACCCGTTCGGTCAGTGGCCAGCATC。

上述技术方案所述的引物组在检测katG基因315位点突变中的应用。

上述技术方案所述的引物组在检测结核分枝杆菌对异烟肼耐药性中的应用。

上述技术方案所述的引物组在制备检测katG基因315位点突变试剂盒中的应用。

上述技术方案所述的应用，其中，所述应用的具体过程为：