[发明专利]微生物转化制备咖啡因的方法在审
| 申请号： | 201810085392.4 | 申请日： | 2018-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN110093391A | 公开（公告）日： | 2019-08-06 |
| 发明（设计）人： | 刘轩 | 申请（专利权）人： | 德州翔煊医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/40 | 分类号： | C12P19/40;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京金蓄专利代理有限公司 11544 | 代理人： | 孙巍 |
| 地址： | 253000 山东省德州市经济技术开发区袁桥镇东方红*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 咖啡因 微生物转化 囊菌 制备 残留有害物质 农作物废弃物 冠突散囊菌 城市绿化 混合菌种 使用设备 转化条件 溶剂 催化剂 底物 菌种 废弃物 | ||
1.微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，微生物转化的反应体系中以不含咖啡因的城市绿化废弃物和农作物废弃物作为底物，以间型散囊菌(Eurotium intermedium,CGMCC 3.4318)、谢瓦散囊菌(Eurotium chevalieri,CGMCC 3.6492)、冠突散囊菌(Eurotium cristatum,CGMCC 3.0448)、阿姆斯特丹散囊菌(Eurotium amstelodami,CGMCC3.6518)、蜡叶散囊菌(Eurotium herbarioum,CGMCC 3.6496)中的一种或多种菌种作为微生物转化菌种，转化条件为15℃～45℃的温度下培养1～15天。
2.根据权利要求1所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述发酵产物为所用菌种经液体发酵或固体发酵后产物经蒸发、减压干燥处理后得到的浸膏。
3.根据权利要求2所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述菌种发酵前进行至少2次活化处理，培养至培养基上长满菌落，取出活化后菌种悬浮于无菌水中，再将悬浮液定容后震荡混匀，制成均匀的孢子悬液，所述孢子悬液的孢子浓度为5.0～6.0×108CFU/ml，孢子接种量为1％～20％。
4.根据权利要求2所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述固体发酵包括：将孢子悬液直接均匀喷涂于城市绿化废弃物和农作物废弃物表面，将废弃物自身作为发酵的碳源于无菌培养箱中培养1-15天指定时间后将整体发酵产物经水溶液提取、抽滤，所得产物为固体发酵的产物。
5.根据权利要求2所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述液体发酵包括：将不含咖啡因的城市绿化废弃物和农作物废弃物制成粉末，加入无菌水，进行煎煮、抽滤，所得滤液为底物提取液，所述底物提取液中加入0～20％的葡萄糖作为发酵的碳源，调整pH为3.0～8.0，将孢子悬液加入到底物提取液中震荡培养，离心后得上层悬液为液体发酵的产物。
6.根据权利要求5所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述孢子悬液加入到底物提取液中装液量为1/20～2/3摇瓶量，震荡培养的转速为0～180r/min。
7.根据权利要求1所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，所述微生物转化的反应体系的底物选自银杏叶、桑叶、辣椒叶、杨树叶、槐树叶、柳树叶中的一种。
8.根据权利要求1所述微生物转化制备咖啡因的方法，其特征在于，微生物转化产物经大孔树脂法提取咖啡因，以35％乙醇作为洗脱剂。
9.一种由权利要求1至9任一所述微生物转化制备咖啡因的方法制得的咖啡因，纯度高于98％。
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